Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibody ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်း) သည် Thermus aquaticus YT-1 မှ hot-start thermostable DNA polymerase တစ်ခုဖြစ်ပြီး 5′→3′ polymerase လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် 5´ flap endonuclease လုပ်ဆောင်ချက်တို့ပါရှိသည်။Taq DNA polymerase သည် thermolabile Taq ပဋိပစ္စည်းများဖြင့် ပြုပြင်ထားသော Taq DNA polymerase ဖြစ်သည်။ပဋိပစ္စည်းမွမ်းမံခြင်းသည် PCR ၏ တိကျမှု၊ အာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် အထွက်နှုန်းကို တိုးစေသည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
| အစိတ်အပိုင်း | HC1012Aစာ-၀၁ | HC1012Aစာ-၀၂ | HC1012Aစာ-၀၃ | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 mL | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibody ပြုပြင်ထားသော) (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 10×5 mL |
လျှောက်လွှာများ
10 mM Tris-HCl (25 ℃ တွင် pH 7.4)၊ 100 mM KCl၊ 0.1 mM EDTA၊ 1 mM dithiothreitol၊ 0.5% Tween20၊ 0.5% IGEPALCA-630 နှင့် 50% Glycerol။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေ
သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးသည် 0°C အောက်တွင်ရှိပြီး -25°C~-15°C တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်
တစ်ယူနစ်ကို 75°C တွင် မိနစ် 30 အတွင်း အက်ဆစ်မပျော်ဝင်နိုင်သော ပစ္စည်းအဖြစ် 15 nmol ၏ dNTP ပေါင်းစပ်သည့် အင်ဇိုင်းပမာဏဟု သတ်မှတ်သည်။
အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု
1.Endonuclease လုပ်ဆောင်ချက်:4 μg pUC19 DNA ပါရှိသော အင်ဇိုင်း 20 U ကို 37 ℃ တွင် 4 နာရီကြာ ပေါက်ဖွားခြင်းဖြင့် gel electrophoresis မှ သတ်မှတ်သည့်အတိုင်း DNA ၏ ခွဲခြားသိမြင်နိုင်သော ဆုတ်ယုတ်မှု မရှိခဲ့ပါ။
2.5 kb Lambda PCR-200 µM dNTPs နှင့် 0.2 µM primers များရှေ့မှောက်တွင် Taq DNA Polymerase 1.25 ယူနစ်ဖြင့် 5 ng Lambda DNA ၏ PCR ချဲ့ထွင်မှု 25 သံသရာသည် မျှော်လင့်ထားသော 5 kb ထုတ်ကုန်ကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။
3.Exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်:10 nmol 5´-FAM oligonucleotide နှင့် 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide ပါ၀င်သော အနည်းဆုံး 12.5 U ၏ 50 µl တုံ့ပြန်မှုအား အပူချိန် 37 ဒီဂရီတွင် မိနစ် 30 ကြာ ပေါက်ဖွားခြင်းသည် မတွေ့နိုင်သော ယိုယွင်းပျက်စီးမှု မရှိပါ။
4.RNase လုပ်ဆောင်ချက်:37°C တွင် 2 နာရီကြာ 37°C တွင် 2 နာရီကြာ အင်ဇိုင်း 20 U ပါ၀င်သော 10 µL တုံ့ပြန်မှုကို ပေါက်ဖွားခြင်းသည် gel electrophoresis မှသတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်း RNA ၏ပျက်စီးခြင်းကို မဖြစ်ပေါ်စေပါ။
5.အပူမဖွင့်ခြင်း-မရှိ
တုံ့ပြန်မှုစနစ်
| အစိတ်အပိုင်းများ | အတွဲ |
| နမူနာပုံစံ DNAa | ရွေးချယ်ခွင့် |
| 10 μM ရှေ့သို့ Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| dNTP ရောနှော (10mM တစ်ခုစီ) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseခ(5U/μL) | 0.125 μL |
| နူကလီးယားကင်းစင်သောရေ | 25 μL အထိ |
မှတ်စုများ-
1) a.
| DNA | ပမာဏ |
| မျိုးရိုးဗီဇ | 1 ng-1 μg |
| Plasmid သို့မဟုတ် Viral | 1 pg-1 ng |
၂) ခ။အထူးပြုအသုံးချမှုများတွင် Taq DNA Polymerase ၏ အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသည် 5-50 ယူနစ်/mL (0.1-0.5 ယူနစ်/25 µL တုံ့ပြန်မှု) မှ ကွာနိုင်သည်။
အပူစက်ဘီးစီးခြင်း ပရိုတိုကော
PCR
| အဆင့် | အပူချိန်(°C) | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
| ကနဦး အသွင်အပြင်a | 95 ℃ | 1-3 မိနစ် | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 သံသရာ |
| ဖြာထွက်ခြင်း။ခ | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| တိုးချဲ့မှု | 68 ℃ | 1kb/မိနစ် | |
| နောက်ဆုံး တိုးချဲ့မှု | 68 ℃ | ၅ မိနစ် | - |
မှတ်စုများ-
1) 95°C တွင် 1 min ၏ကနဦး denaturation သည် amplification အများစုအတွက် လုံလောက်ပါသည်။ခက်ခဲသောပုံစံများအတွက်၊ အပူချိန် 95°C တွင် 2-3mins ပိုကြာအောင်ပြုလုပ်ရန် အကြံပြုထားသည်။ကိုလိုနီ PCR ဖြင့်၊ 95°C တွင် ကနဦး 5mins denaturation ကို အကြံပြုထားသည်။
2) annealing အဆင့်သည် ပုံမှန်အားဖြင့် 15-60 s ဖြစ်သည်။Annealing temperature သည် primer pair ၏ Tm ပေါ်တွင် အခြေခံပြီး ပုံမှန်အားဖြင့် 45-68 ℃ ဖြစ်သည်။
