DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
ကြောင်နံပါတ် HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) သည် တစ်ခုတည်းသော သို့မဟုတ် နှစ်ဆသော DNA ကို ချေဖျက်နိုင်သော endodeoxyribonuclease ဖြစ်သည်။၎င်းသည် monodeoxynucleotides သို့မဟုတ် 5'-terminal ရှိ phosphate အုပ်စုများနှင့်အတူ monodeoxynucleotides သို့မဟုတ် single- သို့မဟုတ် double-stranded oligodeoxynucleotides ထုတ်လုပ်ရန် phosphodiester နှောင်ကြိုးများကို အသိအမှတ်ပြုပြီး ဖြတ်သည်။DNase I ၏လုပ်ဆောင်ချက်သည် Ca ပေါ်တွင်မူတည်သည်။2+Mn ကဲ့သို့သော divalent metal ion များဖြင့် အသက်သွင်းနိုင်သည်။2+နှင့် Zn2+.5 mM Ca2+အင်ဇိုင်းကို hydrolysis မှကာကွယ်ပေးသည်။မောင်မောင်၏ရှေ့မှောက်တွင်၊2+အင်ဇိုင်းသည် မည်သည့် DNA ကြိုးမျှင်ပေါ်ရှိ မည်သည့်ဆိုဒ်ကိုမဆို ကျပန်းမှတ်မိပြီး ခွဲထုတ်နိုင်သည်။Mn ရဲ့ရှေ့မှာ2+၊ DNA ၏ နှစ်ဆမျှင်များကို တပြိုင်နက်တည်း အသိအမှတ်ပြုနိုင်ပြီး အပြားလိုက် DNA အပိုင်းအစများ သို့မဟုတ် 1-2 nucleotides အပြူးထွက်နေသော စေးကပ်နေသော DNA အပိုင်းအစများ ဖွဲ့စည်းရန် တူညီသောနေရာတစ်ခုနီးပါးတွင် ထွင်းဖောက်နိုင်သည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
| နာမည် | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I၊ RNase အခမဲ့ | 20μL | 200μL | 1mL | 10 mL |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5×10 mL |
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
သိုလှောင်မှုအတွက် -25 ℃ ~ 15 ℃;ရေခဲအိတ်များအောက်တွင် ပို့ဆောင်ပါ။
ညွှန်ကြားချက်များ
1. အောက်ဖော်ပြပါ အချိုးအစားအရ RNase-free ပြွန်အတွင်း တုံ့ပြန်မှုအဖြေကို ပြင်ဆင်ပါ။
| အစိတ်အပိုင်း | အတွဲ |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I၊ RNase-free (5U/μL) | µg RNA လျှင် 1 U |
| ddH2O | 10μL အထိ |
မှတ်ချက်- ① RNA ပမာဏအပေါ် အခြေခံ၍ ထည့်ရန်လိုအပ်သော DNase I ၏ ပမာဏကို တွက်ချက်ပါ။
2. 37 ℃ 15 မိနစ်;
3. 0.5M EDTA ကို 2.5mM~5mM ၏ နောက်ဆုံးပြင်းအားသို့ ပေါင်းထည့်ကာ တုံ့ပြန်မှုကိုရပ်တန့်ရန် 65℃ တွင် 10 မိနစ်ကြာ အပူပေးပါ။နမူနာကို နောက်ပြန်တုံ့ပြန်မှုဖြစ်သည့် reverse transcription အတွက် တိုက်ရိုက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။စမ်းသပ်မှု။
ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်
တစ်ယူနစ်ကို pBR322 ၏ 1µg လုံးလုံး ကျဆင်းသွားစေမည့် အင်ဇိုင်းပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်သည်။DNA သည် 37 ဒီဂရီတွင် 10 မိနစ်။
အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု
RNase-1.6µg MS2 RNA ပါသော DNase I ၏ 5U သည် 37 ℃ တွင် 4 နာရီကြာ ပြိုကွဲခြင်းမရှိပါ။agarose gel electrophoresis ဖြင့်ဆုံးဖြတ်သည်။
မှတ်စုများ
1. ကျေးဇူးပြု၍ 0.5MEDTA ကို သင်ကိုယ်တိုင် ပြင်ဆင်ပါ။
2. RNA ၏ µg လျှင် 1U DNase I ကိုသုံးပါ။သို့သော် RNA သည် 1µg ထက်နည်းပါက 1U DNase I ကိုအသုံးပြုပါ။
3. ခွဲစိတ်နေစဉ်အတွင်း အင်ဇိုင်းကို ရေခဲပေါ်တွင် ထားပေးပါ။
