အပူချိန် ထိခိုက်လွယ်သော UNG

Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) သည် E. coli တွင် ပြန်လည်ပေါင်းစပ်ထားသော အသုံးအနှုန်းဖြင့် ရရှိသည်။အင်ဇိုင်းသည် uracil တစ်ခုတည်းနှင့် ကြိုးနှစ်ထပ်ပါရှိသော DNA မှ အခမဲ့ uracil ထုတ်လွှတ်မှုကို လှုံ့ဆော်ပေးပြီး RNA ကို ဆန့်ကျင်သည်။သမားရိုးကျ UNG အင်ဇိုင်းသည် E. coli ဗီဇမူလအစနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက TS-UNG အင်ဇိုင်းသည် အပူချိန်နိမ့်သော (20 ℃ ~ 37 ℃) တွင် လှုပ်ရှားမှုပိုမိုမြင့်မားပြီး အပူချိန်ထိခိုက်လွယ်ပြီး အလွယ်တကူ အသက်မသွင်းနိုင် (50 ℃)၊ dUTP ပါဝင်သော ချဲ့ထွင်မှုကို ရှောင်ရှားခြင်း၊ သမားရိုးကျ UNG အင်ဇိုင်းကို အသက်မသွင်းပြီးနောက် ကျန်ရှိနေနိုင်သည့် ကြွင်းကျန်သောလုပ်ဆောင်ချက်ဖြင့် အခန်းအပူချိန်တွင် ထုတ်ကုန်များ။ထို့ကြောင့် TS-UNG အင်ဇိုင်းသည် PCR ညစ်ညမ်းမှုကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုအတွက်သာ သင့်လျော်သည်သာမက RT-PCR ချဲ့ထွင်မှုအစီအစဉ်နှင့်လည်း ကိုက်ညီပြီး RT-PCR ညစ်ညမ်းမှုကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုတွင် အသုံးပြုနိုင်သည်။

အကြံပြုထားသောလျှောက်လွှာ

ညစ်ညမ်းမှု ကာကွယ်ရေး ချဲ့ထွင်ခြင်း။

သိုလှောင်မှုအခြေအနေ

-20°C ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းထားရန်၊ အသုံးမပြုမီ ကောင်းစွာရောစပ်ထားသင့်ပြီး မကြာခဏ အေးခဲနေသော အေးခဲခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။

သိုလှောင်မှုကြားခံ

20 mM Tris-HCl (pH 7.5)၊ 100 mM NaCl၊ 0.1 mM EDTA၊ 1 mM DTT၊ Stabilizer၊ 50% Glycerol။

ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်

37°C တွင် 1 နာရီအတွင်း dU အခြေခံများပါရှိသော သောင်တင်ထားသော DNA ၏ 1µg ကို ချေဖျက်ရန် လိုအပ်သော အင်ဇိုင်းပမာဏသည် လှုပ်ရှားမှု 1 ယူနစ် (U) ဖြစ်သည်။

အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

1.SDS-PAGE electrophoretic သန့်စင်မှု 98% ထက်ကြီးသည်

2.ဆုတ်ယုတ်ခြင်း လုပ်ဆောင်ချက်၊ သုတ်-တစ်သုတ် ထိန်းချုပ်မှု၊ တည်ငြိမ်မှု

3.exogenous nuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိပါ၊ exogenous endonuclease သို့မဟုတ် exonuclease ညစ်ညမ်းမှုမရှိပါ။

ညွှန်ကြားချက်များ

မှတ်ချက်- a- qPCR/qRT-PCR အတွက် အသုံးပြုပါက၊ fluorescent probe ကို တုံ့ပြန်မှုစနစ်ထဲသို့ ထည့်သွင်းသင့်သည်။အများအားဖြင့်၊ 0.2 µM ၏ နောက်ဆုံး primer သည် ရလဒ်ကောင်းများကို ပေးစွမ်းနိုင်သည်။တုံ့ပြန်မှုစွမ်းဆောင်ရည်ညံ့သောအခါ၊ primer အာရုံစူးစိုက်မှုကို 0.2-1 μM အကွာအဝေးတွင်ချိန်ညှိနိုင်သည်။အများအားဖြင့်၊ probe အာရုံစူးစိုက်မှုကို 0.1-0.3 μM အကွာအဝေးတွင် အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပြုလုပ်ထားသည်။primer နှင့် probe ၏ အကောင်းဆုံးပေါင်းစပ်မှုကို ရှာဖွေရန် အာရုံစူးစိုက်မှု gradient စမ်းသပ်မှုများကို လုပ်ဆောင်နိုင်သည်။

မှတ်စုများ

1.TS-UNG အင်ဇိုင်း၏အကောင်းဆုံးတုံ့ပြန်မှုအပူချိန်သည်အတော်လေးနိမ့်သည်၊ ၎င်းကို 20 ℃ ~ 37 ℃အကွာအဝေးတွင်အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်ပြုလုပ်နိုင်သည်၊ အင်ဇိုင်း၏သောက်သုံးသောပမာဏနှင့်တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကို 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ အကွာအဝေးတွင်အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်လုပ်ဆောင်နိုင်သည်။ 10 မိနစ်;နှင့် ပြောင်းပြန် ကူးယူခြင်း လုပ်ငန်းစဉ်တွင် အင်ဇိုင်းကို အသက်မသွင်းနိုင်ပါ။

2.ညစ်ညမ်းမှုကို ကာကွယ်ရန် PCR နှင့် RT-PCR များအတွက် သင့်လျော်သည်။

3.မကြာခဏ အေးခဲနေသော အေးခဲခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပြီး ကြီးမားသော အပူချိန် အတက်အကျများကို မထိတွေ့ပါနှင့်။

4.ချဲ့ထွင်ရန် မတူညီသော ဗီဇများသည် dUTP ၏ ကွဲပြားသော အသုံးချမှု ထိရောက်မှုနှင့် UNG အင်ဇိုင်းအတွက် အာရုံခံနိုင်စွမ်း ရှိသည်၊ ထို့ကြောင့် UNG စနစ်အသုံးပြုခြင်းသည် ထောက်လှမ်းမှု အာရုံခံနိုင်စွမ်း ကျဆင်းသွားပါက၊ တုံ့ပြန်မှုစနစ်အား ချိန်ညှိပြီး ပိုမိုကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်သင့်သည်၊ နည်းပညာဆိုင်ရာ ပံ့ပိုးကူညီမှု လိုအပ်ပါက ကျေးဇူးပြု၍ ဆက်သွယ်ပါ။ ကျွန်တော်တို့ရဲ့ကုမ္ပဏီ။