Ultra Nuclease GMP အဆင့်
ကြောင်နံပါတ်- HC2016A
UltraNuclease GMP-grade ကို Escherichia coli (E.coli) တွင် GMP ပတ်၀န်းကျင်အောက်တွင် မျိုးရိုးဗီဇအင်ဂျင်နီယာနှင့် ပြင်ဆင်ထားခြင်းဖြင့် ဖော်ပြပြီး သန့်စင်ပါသည်။၎င်းသည် သိပ္ပံသုတေသနတွင် cell supernatant နှင့် cell lysate ၏ viscosity ကို လျှော့ချနိုင်ပြီး ပရိုတင်းသန့်စင်မှု ထိရောက်မှုကို တိုးမြှင့်ပေးပြီး ပရိုတင်းလုပ်ငန်းဆောင်တာဆိုင်ရာ သုတေသနပြုမှုကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်သည်။ထုတ်ကုန်သည် ဗိုင်းရပ်စ်သန့်စင်ခြင်း၊ ကာကွယ်ဆေးထုတ်လုပ်ခြင်းနှင့် ပရိုတင်း/polysaccharide ဆေးဝါးထုတ်လုပ်ခြင်းအပါအဝင် အပလီကေးရှင်းများ၏ စွမ်းဆောင်ရည်နှင့် ဇီဝထုတ်ကုန်များ၏ စွမ်းဆောင်ရည်နှင့် ဘေးကင်းမှုကို မြှင့်တင်ပေးသည့် နျူကလိစ်အက်ဆစ်အကြွင်းအကျန်များကို pg-grade သို့ လျှော့ချနိုင်သည်။ထို့အပြင်၊ ဆဲလ်ကုထုံးနှင့် ကာကွယ်ဆေး ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် လူ့အရံသွေး mononuclear cells (PBMC) များ စုပုံနေခြင်းကို တားဆီးရန်အတွက်လည်း ထုတ်ကုန်ကို အသုံးပြုနိုင်သည်။
UltraNuclease ကို ကြားခံတွင် စွန့်ထုတ်ထားသော (20mM Tris-HCL pH 8.0၊ 2mM MgCl၊ 20 mM NaCl၊ 50% glycerin)၊ အရောင်ကင်းသော၊ ဖောက်ထွင်းမြင်ရသော အရည်အသွင်အပြင်ဖြင့် ပိုးသတ်ထားသော ဓာတ်တစ်မျိုးပုံစံဖြင့် ပံ့ပိုးပေးပါသည်။ဤထုတ်ကုန်ကို GMP လုပ်ငန်းစဉ်လိုအပ်ချက်များဖြင့် ထုတ်လုပ်ထားပြီး အရည်ပုံစံဖြင့် ထုတ်ပေးပါသည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
UltraNuclease GMP အဆင့် (250 U/μL)
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန်ကို ရေခဲခြောက်ဖြင့် ပို့ဆောင်ထားပြီး -25 ℃ ~ - 15 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် နှစ်နှစ်ကြာ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။
ထုတ်ကုန်ကိုဖွင့်ပြီး 4 ℃ထက် တစ်ပတ်ထက်ပို၍ သိမ်းဆည်းထားပါက စစ်ထုတ်ရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။microbial ညစ်ညမ်းမှုကိုကာကွယ်ရန်ထုတ်ကုန်။
သတ်မှတ်ချက်များ
| Expression Host | UltraNuclease မျိုးဗီဇနှင့် ပြန်လည်ပေါင်းစပ်ထားသော E. coli |
| မော်လီကျူးအလေးချိန် | 26.5 kDa |
| လျှပ်စစ်အချက် | ၆.၈၅ |
| သန့်ရှင်းစင်ကြယ်ခြင်း။ | ≥99% (SDS-PAGE) |
| Storage Buffer | 20mM Tris-HCL pH 8.0၊ 2mM MgCl၊ 20 mM NaCl၊ 50% glycerin |
|
ယူနစ်အဓိပ္ပါယ် | လုပ်ဆောင်ချက်ယူနစ်တစ်ခု (U) ၏ အဓိပ္ပါယ်ဖွင့်ဆိုချက်မှာ အသုံးပြုသော အင်ဇိုင်းပမာဏဖြစ်သည်။2. 625 mL တွင် မိနစ် 30 အတွင်း ΔA260 ၏ စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးကို 1.0 ဖြင့် ပြောင်းလဲပါ။pH 8.0 ရှိသော 37 ℃ တွင် တုံ့ပြန်မှုစနစ် (ပြီးပြည့်စုံသော အစာခြေခြင်းနှင့် ညီမျှသည်။37 μg ဆယ်လ်မွန်သုတ်ပိုး DNA ကို oligonucleotides အဖြစ်သို့)။ |
ညွှန်ကြားချက်များ
1. နမူနာ စုဆောင်းမှု
တွယ်ဆက်နေသည့်ဆဲလ်များ- ကြားခံကို ဖယ်ရှားပါ၊ ဆဲလ်များကို PBS ဖြင့် ဆေးကြောပါ၊ လွန်ကဲသော ဆဲလ်များကို ဖယ်ရှားပါ။
Suspension ဆဲလ်များ- ဆဲလ်များကို ဗဟိုပြုခြင်းဖြင့် စုဆောင်းပါ၊ ဆဲလ်များကို PBS ဖြင့် ဆေးပါ၊ 6,000 ဖြင့် centrifugerpm 10 မိနစ်ကြာ၊ ဘူးကိုစုဆောင်းပါ။
Escherichia coli- ဘက်တီးရီးယားများကို ဗဟိုပြု၍ စုဆောင်းပါ၊ PBS ဖြင့် တစ်ကြိမ်ဆေးပါ၊ 8,000 ဖြင့် centrifugerpm ကို 5 မိနစ်လောက်ထားပြီး pellet ကို စုဆောင်းပါ။
2. နမူနာကုသမှု
စုဆောင်းထားသော ဆဲလ်အမှုန့်များကို ထုထည်(g) နှင့် ထုထည်(mL)1:(10-20) အချိုးတွင် lyse buffer ဖြင့် ကုသပါ၊ သို့မဟုတ် ရေခဲပေါ်တွင် စက်ပိုင်းဆိုင်ရာ သို့မဟုတ် ဓာတုဗေဒနည်းများဖြင့် သို့မဟုတ် အခန်းအပူချိန်တွင် (ဆဲလ်အမှုန့် 1g ခန့်ပါ၀င်သည် ။
ဆဲလ် ၁၀၉)။
3. အင်ဇိုင်းကုသမှု
တုံ့ပြန်မှုစနစ်သို့ 1-5mM MgCl ထည့်ပြီး pH ကို 8-9 သို့ ချိန်ညှိပါ။
ဆဲလ်အမှုန့် 1 ဂရမ်ကို ချေဖျက်ရန် ယူနစ် 250 အချိုးအရ UltraNuclease ကို ပေါင်းထည့်ကာ 37 ℃ တွင် မိနစ် 30 ကျော်ကြာ သားဖောက်ပါ။ကျေးဇူးပြု၍ ရွေးချယ်ရန် "အကြံပြုထားသော တုံ့ပြန်မှုအချိန်" ဖောင်ကို ကိုးကားပါ။ကုသမှု၏ကြာချိန်။
4. Supernatant စုဆောင်းမှု
12,000 rpm တွင် မိနစ် 30 ကြာ centrifuge လုပ်ပြီး supernatant ကို စုဆောင်းပါ။
မှတ်ချက်- အရည်သည် အက်စစ်ဓာတ် သို့မဟုတ် အယ်ကာလီ၊ သို့မဟုတ် ဆား၊ ဆပ်ပြာရည်များ မြင့်မားစွာပါဝင်နေပါက သို့မဟုတ်၊denaturants များ၊ အင်ဇိုင်းပမာဏကို တိုးမြှင့်ပါ သို့မဟုတ် ကုသမှုအချိန်ကို လျော်ညီစွာ တိုးချဲ့ပါ။
တုံ့ပြန်မှု conditi အကြံပြုထားသည်။ons
| ကန့်သတ်ချက် | အကောင်းဆုံးအခြေအနေ | ထိရောက်သောအခြေအနေ |
| Mg²+ အာရုံစူးစိုက်မှု | 1-5 မီလီမီတာ | 1-10 မီလီမီတာ |
| pH | ၈-၉ | ၆-၁၀ |
| အပူချိန် | 37 ℃ | 0-42 ℃ |
| DTT အာရုံစူးစိုက်မှု | 0-100 မီလီမီတာ | >0 မီလီမီတာ |
| Mercaptoethanol အာရုံစူးစိုက်မှု | 0-100 မီလီမီတာ | >0 မီလီမီတာ |
| Monovalent Cation အာရုံစူးစိုက်မှု | 0-20 မီလီမီတာ | 0-150 မီလီမီတာ |
| Phosphate lon Concentration | 0-10 မီလီမီတာ | 0-100 မီလီမီတာ |
အကြံပြုသည်။ တုံ့ပြန်ခြင်း။ အချိန် (၃၇ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်၊ ၂ mM Mg²+၊ pH ၈.၀)
| UltraNuclease ပမာဏ (နောက်ဆုံး အာရုံစူးစိုက်မှု) | တုံ့ပြန်ချိန် |
| 0.25 U/ml | > 10 နာရီ |
| 2.5 U/ml | > ၄ နာရီ |
| 25 U/ml | 30 မိနစ် |
မှတ်စုများ-
သင့်ကျန်းမာရေးနှင့် ဘေးကင်းစေရန်အတွက် လိုအပ်သော PPE၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီနှင့် လက်အိတ်များကို ဝတ်ဆင်ပါ။
