Multiplex One Step RT-qPCR Premix
ဖော်ပြချက်
ကြောင်နံပါတ်- HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix သည် ပုံစံပလိတ်အဖြစ် RNA ကိုအခြေခံထားသော multiplex quantitative PCR Kit တစ်ခုဖြစ်သည်။စမ်းသပ်မှုတွင်၊ ပြောင်းပြန်ကူးယူဖော်ပြခြင်းနှင့် ပမာဏ PCR တို့ကို တူညီသောတုံ့ပြန်မှုပြွန်တွင် လုပ်ဆောင်ပြီး စမ်းသပ်လည်ပတ်မှုကို ရိုးရှင်းစေပြီး ညစ်ညမ်းမှုအန္တရာယ်ကို လျှော့ချပေးသည်။ကြားခံနှင့် အင်ဇိုင်းရောနှောခြင်း၏ ထူးခြားသော ဒီဇိုင်းကို အဆင့်တစ်ဆင့် lyophilized စနစ်တွင် အသုံးပြုနိုင်သည်။အစုံလိုက်သည် ပမာဏချဲ့ထွင်ရန်အတွက် hotstart Taq DNA Polymerase ကို အသုံးပြု၍ ပထမကြိုးမျှင် cDNA ၏ထိရောက်စွာပေါင်းစပ်မှုအတွက် အပူဒဏ်ခံနိုင်သော Reverse Transcriptase ကို အသုံးပြုထားသည်။၎င်းတွင် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသော တုံ့ပြန်မှုကြားခံ၊ အင်ဇိုင်းများရောနှောခြင်း စသည်တို့ပါရှိပြီး တိကျသောမဟုတ်သော PCR ချဲ့ထွင်မှုကို ထိရောက်စွာတားဆီးကာ qPCR တုံ့ပြန်မှုအများအပြား၏ ချဲ့ထွင်မှုထိရောက်မှုကို မြှင့်တင်ပေးသည့်အချက်များပါဝင်ပြီး primers များ၏ ချဲ့ထွင်မှုထိရောက်မှုကိုသေချာစေပြီး များပြားလှသော fluorescence ပမာဏချဲ့ထွင်မှုကိုသေချာစေသည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
| နာမည် |
| 1. Lyo-Buffer |
| 2. Lyo-Enzyme ရောနှောခြင်း။ |
| 3. Lyo အကာအကွယ် |
သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးအခြေအနေအိုင်း
A: Lyo-buffer နှင့်အကာအကွယ်--25~-15℃၊ ကမ်းလွန်ရေသည် 1 နှစ်ဖြစ်သည်။
B: Lyo-အင်ဇိုင်းရောနှော၊ 2-8 ℃၊ သိုလှောင်မှုသက်တမ်းသည် 6 လဖြစ်သည်။
လည်ပတ်မှုလမ်းညွှန်
1. တုံ့ပြန်မှုစနစ် (ဥပမာ 25μL ကိုယူပါ)
| အစိတ်အပိုင်းများ | ထုထည် (μL) | နောက်ဆုံး အာရုံစူးစိုက်မှု |
| Lyo-Buffer | 6 | 1* |
| Lyo-Enzyme ရောနှောခြင်း။ | 1 | - |
| Lyo-Protectant | 8 | - |
| Primer Mix (10μM) | 1 | 0.1- 1uM |
| Probe Mix (10μM) | ၀.၅ | 0.05-0.5uM |
| RNA နမူနာပုံစံ | 5 | - |
| DEPC H2O | ၂၅ အထိ | - |
2. Optimized Cycling Protocol
1) Standard Cycling Protocol
| တုံ့ပြန်မှုအဆင့် | အပူချိန် | အချိန် | သံသရာ | |
| 1 | စာသားပြောင်းပြန် | 50°Ca | ၁၀ မိနစ် | 1 |
| 2 | ကနဦး အသွင်အပြင် | 95°C | ၅ မိနစ် | 1 |
| 3 | ချဲ့ထွင်တုံ့ပြန်မှု | 95°C | 15 စက္ကန့် | ၄၅ သံသရာ |
| 60°Cb | 30 စက္ကန့်c |
2) အမြန်စက်ဘီးစီးခြင်း ပရိုတိုကော
|
| တုံ့ပြန်မှုအဆင့် | အပူချိန် | အချိန် | သံသရာ |
| 1 | စာသားပြောင်းပြန် | 50°Ca | 2 မိနစ် | 1 |
| 2 | ကနဦး အသွင်အပြင် | 95°C | 2 စက္ကန့် | 1 |
| 3 | ချဲ့ထွင်တုံ့ပြန်မှု | 95°C | 1 စက္ကန့် |
၄၅ သံသရာ |
| 60°Cb | 13 စက္ကန့်c |
မှတ်ချက် -
a) ပြောင်းပြန် စာသားမှတ်တမ်း: အပူချိန်သည် 42°C သို့မဟုတ် 50°C ကို 10-15 မိနစ်အထိ ရွေးချယ်နိုင်ပါသည်။
b) ချဲ့ထွင်တုံ့ပြန်မှု: ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော primers များ၏ Tm တန်ဖိုးအရ အပူချိန်ကို ချိန်ညှိသည်။
ဂ)မီးချောင်း အချက်ပြ မှီး: ကျေးဇူးပြု၍ စမ်းသပ်လုပ်ထုံးလုပ်နည်းကို လိုအပ်ချက်များနှင့်အညီ သတ်မှတ်ပါ။တူရိယာလက်စွဲစာအုပ်။
နည်းပညာဆိုင်ရာ အချက်အလက်/သတ်မှတ်ချက်များ
| ဟော့စတင် | Built-in hot start |
| ထောက်လှမ်းနည်း | Primer-probe ထောက်လှမ်းခြင်း။ |
| PCR နည်းလမ်း | အဆင့်တစ်ဆင့် RT-qPCR |
| နမူနာအမျိုးအစား | RNA |
မှတ်စုများ
1. ဤထုတ်ကုန်သည် သုတေသနအတွက်သာဖြစ်သည်။
2. သင့်ကျန်းမာရေးနှင့် ဘေးကင်းစေရန်အတွက် လိုအပ်သော PPE၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီနှင့် လက်အိတ်များ ဝတ်ဆင်ပါ။
