M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase

ကြောင်နံပါတ်-HC2004A

အထုပ်- 0.1ml/1ml/5ml

ကုန်ပစ္စည်းအကြောင်းအရာ

ထုတ်ကုန်အသေးစိတ်

Neoscript Reverse Transcriptase သည် E.coli တွင် Moloney murine leukemia ဗိုင်းရပ်စ်၏ M-MLV မျိုးဗီဇ၏ ဗီဇပြောင်းပြန်စစ်ဆေးခြင်းမှ ရရှိသော ပြောင်းပြန် transcriptase တစ်ခုဖြစ်သည်။အင်ဇိုင်းသည် RNase H လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဖယ်ရှားပေးသည်၊ မြင့်မားသော အပူချိန်ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး၊ မြင့်မားသော အပူချိန်ပြောင်းပြန် မှတ်တမ်းအတွက် သင့်လျော်သည်။ထို့ကြောင့်၊ ၎င်းသည် RNA ၏အဆင့်မြင့်ဖွဲ့စည်းပုံနှင့် cDNA ပေါင်းစပ်မှုတွင် သီးခြားမဟုတ်သောအချက်များ၏ မနှစ်သက်ဖွယ်အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် အထောက်အကူဖြစ်ပြီး ပိုမိုတည်ငြိမ်မှုနှင့် ပြောင်းပြန်ကူးယူပေါင်းစပ်နိုင်စွမ်းရှိသည်။အင်ဇိုင်းသည် ပိုမိုတည်ငြိမ်မှုနှင့် ပြောင်းပြန်ကူးယူပေါင်းစပ်မှုစွမ်းရည် မြင့်မားသည်။

ယခင်- M-MLV Reverse Transcriptase HC2003B

နောက်တစ်ခု: M-MLV Reverse Transcriptase (Glycerol အခမဲ့) HC2005A

အစိတ်အပိုင်းများ

1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptase

2.5 × First-Stand Buffer (ချန်လှပ်ထားနိုင်သည်)

* 5 × First-Strand Buffer တွင် dNTP မပါဝင်ပါ၊ တုံ့ပြန်မှုစနစ်ကို ပြင်ဆင်သည့်အခါ ကျေးဇူးပြု၍ dNTPs ထည့်ပါ

အကြံပြုထားသောလျှောက်လွှာ

1.အဆင့်တစ်ဆင့် qRT-PCR။

2.RNA ဗိုင်းရပ်စ်ရှာဖွေရေး။

သိုလှောင်မှုအခြေအနေ

-20°C ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းထားရန်၊ အသုံးမပြုမီ ကောင်းစွာရောစပ်ထားသင့်ပြီး မကြာခဏ အေးခဲနေသော အေးခဲခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။

ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်

ယူနစ်တစ်ခုသည် poly(A)•oligo(dT) ကို အသုံးပြု၍ 37°C တွင် 10 မိနစ်အတွင်း dTTP ၏ 1 nmol ပေါင်းစပ်သည်₂₅နမူနာ/ primer အဖြစ်။

အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

1.SDS-PAGE electrophoretic သန့်စင်မှု 98% ထက်ကြီးသည်။

2.ချဲ့ထွင်မှု အာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ batch-to-batch ထိန်းချုပ်မှု၊ တည်ငြိမ်မှု။

3.exogenous nuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိ၊ exogenous endonuclease သို့မဟုတ် exonuclease ညစ်ညမ်းမှု မရှိခြင်း။

First Chain Reaction Solution အတွက် တုံ့ပြန်မှု စနစ်ထည့်သွင်းခြင်း။

1.တုံ့ပြန်မှုအရောအနှော၏ပြင်ဆင်မှု

အစိတ်အပိုင်းများ	အတွဲ
အိုလီဂို(dT)_12-₁₈Primer ပါ။ သို့မဟုတ် ကျပန်း Primer^a သို့မဟုတ် Gene Specific Primers များ^b	50 pmol
	50 pmol (20-100 pmol)
	2 pmol
10 mM dNTP	1 μL
နမူနာပုံစံ RNA	စုစုပေါင်း RNA≤ 5μg;mRNA≤ 1 μg
RNase-free dH₂O	10 μLအထိ

မှတ်စုများ-a/b- သင့်စမ်းသပ်မှုလိုအပ်ချက်အရ ကျေးဇူးပြု၍ primer အမျိုးအစားအမျိုးမျိုးကို ရွေးချယ်ပါ။

2.65°C တွင် 5 မိနစ်ခန့် အပူပေးပြီး 2 မိနစ်ကြာ ရေခဲပေါ်တွင် လျင်မြန်စွာ အအေးခံပါ။

3.အထက်ဖော်ပြပါ အစိတ်အပိုင်းများကို စုစုပေါင်းပမာဏ 20µL တွင် ထည့်ပြီး ညင်သာစွာ ရောမွှေပါ။

အစိတ်အပိုင်းများ	အတွဲ (μL)
5 × ပထမ- Strand Buffer	4
Neoscript Reverse Transcriptase (200 U/μL)	1
RNase inhibitor (40 U/μL)	1
RNase-free dH₂O	20 μLအထိ

4. အောက်ပါအခြေအနေများနှင့်အညီ တုံ့ပြန်မှုကို လုပ်ဆောင်ပါ။

(၁) Random Primer ကိုအသုံးပြုပါက၊ တုံ့ပြန်မှုကို 25 ℃ 10 မိနစ်၊ ထို့နောက် 50 ℃ တွင် 30 ~ 60 မိနစ်ကြာပြုလုပ်သင့်သည်။

(2) Oligo dT သို့မဟုတ် သီးခြား primers ကိုအသုံးပြုပါက၊ တုံ့ပြန်မှုကို 50 ℃ 30 ~ 60 မိနစ်ကြာပြုလုပ်သင့်သည်။

5.Neoscript Reverse Transcriptase ကို အသက်မသွင်းရန်နှင့် တုံ့ပြန်မှုကို အဆုံးသတ်ရန် 95 ℃ တွင် 5 မိနစ်ကြာ အပူပေးပါ။

6.Reverse transcription ထုတ်ကုန်များကို PCR တုံ့ပြန်မှုနှင့် fluorescence quantitative PCR တုံ့ပြန်မှုတွင် တိုက်ရိုက်အသုံးပြုနိုင်သည်၊ သို့မဟုတ် -20 ℃ တွင် အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းထားသည်။

PCR Rလုပ်ဆောင်ချက်

1.တုံ့ပြန်မှုအရောအနှော၏ပြင်ဆင်မှု

အစိတ်အပိုင်းများ	အာရုံစူးစိုက်မှု
10 × PCR Buffer (dNTP အခမဲ့၊ Mg²+ အခမဲ့)	1×
dNTPs (dNTP တစ်ခုစီတွင် 10mM)	200 μM
25 mM MgCl₂	1-4 mM
Taq DNA Polymerase (5U/μL)	2-2.5 U
Primer 1 (10 μM)	0.2-1 μM
Primer 2 (10 μM)	0.2-1 μM
ပုံစံခွက်^a	≤10% First Chain Reaction Solution (2 μL)
ddH₂O	50 μLအထိ

မှတ်စုများ-a- ပထမကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်ကို အလွန်အကျွံထည့်ပါက PCR တုံ့ပြန်မှုကို ဟန့်တားနိုင်သည်။

2.PCR တုံ့ပြန်မှုလုပ်ငန်းစဉ်

အဆင့်	အပူချိန်	အချိန်	ဟုတ်ရဲ့လား။
အကြို denaturation	95 ℃	2-5 မိနစ်	1
Denaturation	95 ℃	10-20 စက္ကန့်	၃၀-၄၀
ဖြာထွက်ခြင်း။	50-60 ℃	10-30 စက္ကန့်
တိုးချဲ့မှု	72 ℃	10-60 စက္ကန့်

မှတ်စုများ

1.42 ℃ ~ 55 ℃ အကွာအဝေးတွင် ပြောင်းပြန် စာသား အပူချိန် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ရန် သင့်လျော်သည်။

2.၎င်းသည် ပိုမိုကောင်းမွန်သော တည်ငြိမ်မှုရှိပြီး မြင့်မားသော အပူချိန်ပြောင်းပြန် စာသားချဲ့ထွင်မှုအတွက် သင့်လျော်သည်။ထို့အပြင်၊ ၎င်းသည် RNA ၏ရှုပ်ထွေးသောဖွဲ့စည်းပုံဆိုင်ရာဒေသများမှတဆင့်ထိရောက်စွာဖြတ်သန်းရန်အတွက်အဆင်ပြေသည်။ထို့အတူ၊one-step multiplex fluorescence quantitative RT-PCR detection အတွက် သင့်လျော်သည်။

3.အမျိုးမျိုးသော PCR ချဲ့ထွင်သော အင်ဇိုင်းများနှင့် ကောင်းစွာ လိုက်ဖက်ညီပြီး မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်း RT-PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် သင့်လျော်သည်။

4.မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းရှိသော အဆင့်တစ်ဆင့် fluorescence quantitative RT-PCR တုံ့ပြန်မှုအတွက် သင့်လျော်သည်၊ တင်းပလိတ်များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းသော အာရုံခံနှုန်းကို ထိရောက်စွာ တိုးတက်စေသည်။

5.cDNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုအတွက် သင့်လျော်သည်။