Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase သည် 5′ → 3′ ပေါ်လီမာရစ်လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် 5´ flap endonuclease လုပ်ဆောင်ချက်တို့ကို ပိုင်ဆိုင်သည့် Thermus aquaticus YT-1 မှ အပူချိန်ထိန်းနိုင်သော DNA ပေါ်လီမာရစ်တစ်ခုဖြစ်သည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
| အစိတ်အပိုင်း | HC1010Aစာ-၀၁ | HC1010Aစာ-၀၂ | HC1010Aစာ-၀၃ | HC1010A-04 |
| 10× Taq ကြားခံ | 2×1 mL | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 5×10 ml |
သိုလှောင်မှုအခြေအနေ
သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးသည် 0°C အောက်တွင်ရှိပြီး -25°C~-15°C တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်
တစ်ယူနစ်ကို 75°C တွင် မိနစ် 30 အတွင်း အက်ဆစ်မပျော်ဝင်နိုင်သော ပစ္စည်းအဖြစ် 15 nmol ၏ dNTP ပေါင်းစပ်သည့် အင်ဇိုင်းပမာဏဟု သတ်မှတ်သည်။
အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု
1.ပရိုတင်း သန့်စင်မှု စစ်ဆေးမှု (SDS-PAGE):Taq DNA polymerase ၏သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုသည် SDS-PAGE ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုမှ ≥95% ဆုံးဖြတ်သည်။
2.Endonuclease လုပ်ဆောင်ချက်:1 μg λDNA ပါ၀င်သော Taq DNA polymerase ၏ 5 U သည် 37 ℃ တွင် 16 နာရီကြာအောင် ခွဲခြားသိမြင်နိုင်သော ယိုယွင်းပျက်စီးခြင်း မရှိပေ။
3.Exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်:1 μg λ -Hind Ⅲ ပါရှိသော Taq DNA polymerase ၏ အနည်းဆုံး 5 U သည် DNA ကို 37 ℃ တွင် 16 နာရီကြာ ချေဖျက်နိုင်ပြီး သတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်း ခွဲခြား၍မရပါ။
4.Nickase လုပ်ဆောင်ချက်:37°C တွင် 16 နာရီကြာ 37°C တွင် 1 µg pBR322 DNA ပါသော Taq DNA polymerase ၏ အနည်းဆုံး 5 U သည် သတ်မှတ်ချက်အရ ခွဲခြား၍မရပါ။
5.RNase လုပ်ဆောင်ချက်:37°C တွင် 16 နာရီကြာ 1.6 μg MS2 RNA ပါသော Taq DNA polymerase ၏ အနည်းဆုံး 5 U သည် သတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်း ခွဲခြား၍မရသော ယိုယွင်းပျက်စီးမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။
6.E. coliDNA-Taq DNA polymerase ၏ 5 U ကို E. coli 16S rRNA locus အတွက် သီးခြား Primers ဖြင့် TaqMan qPCR ကို အသုံးပြု၍ E. coli genomic DNA ပါဝင်မှုကို စစ်ဆေးသည်။E. coli genomic DNA ညစ်ညမ်းမှုသည် ≤1 မိတ္တူဖြစ်သည်။
7.PCR ချဲ့ထွင်မှု (5.0 kb Lambda DNA)- PCR ချဲ့ထွင်မှု 25 ပတ်အတွက် Taq DNA Polymerase 5 ယူနစ်နှင့်အတူ 5 ng Lambda DNA ပါဝင်သော 50 µL တုံ့ပြန်မှုသည် မျှော်လင့်ထားသော 5.0 kb ထုတ်ကုန်တွင် ရလဒ်များဖြစ်သည်။
တုံ့ပြန်မှု စနစ်ထည့်သွင်းခြင်း။
| အစိတ်အပိုင်းများ | အတွဲ |
| နမူနာပုံစံ DNAa | ရွေးချယ်ခွင့် |
| 10 μM ရှေ့သို့ Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP ရောနှော (10mM တစ်ခုစီ) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseခ | 0.25 μL |
| နူကလီးယားကင်းစင်သောရေ | 50 μL အထိ |
မှတ်စုများ-
1) မတူညီသောပုံစံများ၏ အကောင်းဆုံးတုံ့ပြန်မှုအာရုံစူးစိုက်မှုသည် မတူညီပါ။အောက်ပါဇယားသည် 50 µL တုံ့ပြန်မှုစနစ်၏ အကြံပြုထားသော နမူနာပုံစံကို အသုံးပြုမှုကို ပြသသည်။
| DNA | ပမာဏ |
| မျိုးရိုးဗီဇ | 1 ng-1 μg |
| Plasmid သို့မဟုတ် Viral | 1 pg-1 ng |
2) အထူးပြုအသုံးချမှုများတွင် Taq DNA Polymerase ၏ အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသည် 0.25 µL ~ 1 µL မှ ကွာနိုင်သည်။
တုံ့ပြန်ခြင်း။အစီအစဉ်
| အဆင့် | အပူချိန်(°C) | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
| ကနဦး အသွင်အပြင်a | 95 ℃ | ၅ မိနစ် | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 သံသရာ |
| ဖြာထွက်ခြင်း။ခ | 60 ℃ | ၁၅ ၎ | |
| တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | 1kb/မိနစ် | |
| နောက်ဆုံး တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | ၅ မိနစ် | - |
မှတ်စုများ-
1) ကနဦး denaturation အခြေအနေသည် ချဲ့ထွင်သည့် တုံ့ပြန်မှုအများစုအတွက် သင့်လျော်ပြီး ပုံစံပလိတ်တည်ဆောက်ပုံ၏ ရှုပ်ထွေးမှုအရ ပြုပြင်နိုင်သည်။နမူနာပုံစံဖွဲ့စည်းပုံသည် ရှုပ်ထွေးပါက၊ ကနဦး denaturation အကျိုးသက်ရောက်မှု ပိုမိုကောင်းမွန်စေရန်အတွက် ကြိုတင်အရောင်တင်ချိန်ကို 5 မှ 10 မိနစ်အထိ တိုးမြှင့်နိုင်သည်။
2) primer ၏ Tm တန်ဖိုးထက် ယေဘုယျအားဖြင့် primer ၏ Tm တန်ဖိုးထက် 3 ~ 5 ℃ နိမ့်သည်ဟု သတ်မှတ်ထားသော primer ၏ Tm တန်ဖိုးအတိုင်း လိမ်းထားသောအပူချိန်ကို ချိန်ညှိရန်လိုအပ်သည်။ရှုပ်ထွေးသောပုံစံများအတွက်၊ ထိရောက်သောအသံချဲ့ထွင်မှုရရှိရန်၊ annealing temperature ကို ချိန်ညှိရန်နှင့် တိုးချဲ့ချိန်ကို တိုးမြှင့်ရန် လိုအပ်သည်။
