qPCR Premix plus-UNG ကို စူပါစတင်ပါ။
ကြောင်နံပါတ်- HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG သည် lyophilization လုပ်ငန်းစဉ်များအတွက် အထူးပြုထုတ်လုပ်ထားသည့် probe-based detection ကိုအသုံးပြု၍ Real Time PCR အရည်အသွေးနှင့် အရေအတွက်တုံ့ပြန်မှုများအတွက် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော အထူးပြုဓာတ်ပစ္စည်းဖြစ်သည်။၎င်းတွင် အခန်းအပူချိန်တွင် ပိတ်ထားသော ၎င်း၏ Taq အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်ပါရှိသော ဆန်းသစ်သော hot-start အင်ဇိုင်း Hotstart Taq plus (DG) ပါ၀င်ပြီး primer အတိအကျမဟုတ်သော annealing သို့မဟုတ် primer dimer ဖြစ်ပေါ်လာခြင်းကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော အပူချိန်နိမ့်သောအခြေအနေအောက်တွင် တိကျသောမဟုတ်သော ချဲ့ထွင်မှုကို ထိရောက်စွာ ဟန့်တားပေးပါသည်။ ချဲ့ထွင်မှုတုံ့ပြန်မှု၏တိကျမှု။ဤဓာတ်ပစ္စည်းများသည် လျင်မြန်သောပူပြင်းသည့်စတင်မှုရရှိစေရန်အတွက် အကောင်းဆုံးပြင်ဆင်ထားသော qPCR သီးခြားကြားခံစနစ်နှင့် UNG/dUTP ညစ်ညမ်းမှုဆန့်ကျင်ရေးစနစ်ကို အသုံးပြုကာ qPCR တုံ့ပြန်မှု၏ထိရောက်မှုနှင့် အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို ကောင်းစွာတိုးတက်စေသည်။၎င်းသည် ပမာဏကျယ်ပြန့်သော ဧရိယာအများအပြားတွင် ကောင်းမွန်သော စံမျဉ်းကွေးများကို ရယူနိုင်ပြီး ကျန်ရှိသော PCR ထုတ်ကုန်များ သို့မဟုတ် aerosol ညစ်ညမ်းမှုကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော မှားယွင်းသော အပြုသဘောဆောင်သောချဲ့ထွင်မှုကို ထိရောက်စွာ ကာကွယ်ပေးနိုင်သည်။ဤဓာတ်ပစ္စည်းများသည် အသုံးချဇီဝစနစ်များ၊ Eppendorf၊ Bio- Rad နှင့် Roche စသည်တို့ကဲ့သို့သော ထုတ်လုပ်သူများထံမှ fluorescent quantitative PCR တူရိယာအများစုနှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်ပြီး lyophilized ပုံစံတွင် ကောင်းမွန်သောတည်ငြိမ်မှုကိုပြသသည်။
ဓာတ်ပစ္စည်းများပါဝင်မှု
1. 5×HotstartPremix အပေါင်း-UNG (Mg2+အခမဲ့) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (ချန်လှပ်ထားနိုင်သည်)
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
-20 ℃ တွင် ရေရှည်သိုလှောင်မှု;4°C တွင် 3 လအထိ သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။အသုံးမပြုမီနှင့် ကောင်းစွာရောမွှေပါ။ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲပြီး အရည်ပျော်ခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။
စက်ဘီးစီးခြင်းဆိုင်ရာ ပရိုတိုကော
| လုပ်ထုံးလုပ်နည်း | အပူချိန် | အချိန် | သံသရာ |
| အစာမကြေ | 50 ℃ | 2 မိနစ် | 1 |
| Polymerase အသက်သွင်းခြင်း။ | 95 ℃ | ၁~၅ မိနစ် | 1 |
| Denature | 95 ℃ | ၁၀~၂၀ စက္ကန့် | ၄၀-၅၀ |
| Annealing နှင့် Extension များ | 56~64 ℃ | 20~60 s | ၄၀-၅၀ |
qPCR အရည် တုံ့ပြန်မှု Syပင်စည်ဘိတ်
|
ဖွဲ့စည်းမှု |
25µL ပမာဏ |
50µL ပမာဏ |
နောက်ဆုံး အာရုံစူးစိုက်မှု |
| 5× HotstartPremix အပေါင်း-UNG(မောင်2+အခမဲ့) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 မီလီမီတာ |
| 4×lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25× Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| နမူနာပုံစံ DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL သို့ | 50µL သို့ | —— |
1. primers များအတွက် နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှု 0.2μM သည် အများအားဖြင့် ကောင်းမွန်သောရလဒ်များကို ထုတ်ပေးပါသည်။တုံ့ပြန်မှုစွမ်းဆောင်ရည် ညံ့သည့်အခါ၊ လိုအပ်သလို 0.2-1μM အကွာအဝေးအတွင်း primer အာရုံစူးစိုက်မှုကို ချိန်ညှိပါ။Probe အာရုံစူးစိုက်မှုကို ပုံမှန်အားဖြင့် 0.1-0.3μM အကွာအဝေးအတွင်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပေါင်းစပ်မှုများကို ရှာဖွေရန် gradient စမ်းသပ်မှုများမှတဆင့် အကောင်းဆုံးလုပ်ဆောင်သည်။
2. နမူနာပုံစံအမျိုးမျိုးတွင်ပါရှိသောပစ်မှတ်မျိုးဗီဇများ၏မိတ္တူအရေအတွက်သည်ကွဲပြားသည်။လိုအပ်ပါက၊ အကောင်းဆုံးပုံစံထည့်ထားသောပမာဏကိုဆုံးဖြတ်ရန် gradient dilution ကိုလုပ်ဆောင်နိုင်သည်။
3. ဤစနစ်ကို lyophilized လုပ်နိုင်သည်;ဖောက်သည်များသည် အေးခဲ-အခြောက်ခံရန် မလိုအပ်ဘဲ ဤစနစ်ကို အသုံးပြုသည့်အခါ၊ 4×lyoprotectant ကို ရွေးချယ်ထည့်သွင်းနိုင်သည်၊ အကယ်၍ အအေးခံထားသော ထုတ်ကုန်များ လိုအပ်ပါက၊ အရည်ဓာတ်ပစ္စည်းများ၏ စွမ်းဆောင်ရည်ကို အတည်ပြုသည့်အဆင့်တွင်၊ ၎င်းသည် lyophilized စနစ် အစိတ်အပိုင်းများနှင့် လိုက်လျောညီထွေရှိစေရန် 4×lyoprotectant ကို ထည့်ရပါမည်။ နှင့်အကျိုးသက်ရောက်မှုများ။
ဘယ်အချိန်မှာ စနစ်ကို သုံးလဲ။d အေးခဲခြောက်သွေ့ရန်အတွက် ပြင်ဆင်ပါ။ စနစ် as အောက်ပါ-
| ဖွဲ့စည်းမှု | 25µL တုံ့ပြန်မှုစနစ် |
| 5 × HotstartPremix အပေါင်း-UNG (Mg2+အခမဲ့) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4×lyoprotectant | 6.25µL |
| 25× Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | 18 ~ 20µL သို့ |
* အအေးခံခြင်းအတွက် အခြားစနစ်များ လိုအပ်ပါက ကျေးဇူးပြု၍ သီးခြားဆွေးနွေးပါ။
Lyophilization လုပ်ငန်းစဉ်ss
| လုပ်ထုံးလုပ်နည်း | အပူချိန် | အချိန် | အခြေအနေ | ဖိအား |
| ကြိုတင်အေးခဲခြင်း။ | 4 ℃ | 30 မိနစ် | ကိုင်ပါ။ |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 မိနစ် | အအေးခံခြင်း။ | ||
| -50 ℃ | 180 မိနစ် | ကိုင်ပါ။ | ||
| မူလတန်း အခြောက်ခံခြင်း။ | -30 ℃ | 60 မိနစ် | အပူ |
Ultimate Vacuum |
| -30 ℃ | 70 မိနစ် | ကိုင်ပါ။ | ||
| အလယ်တန်း အခြောက်ခံခြင်း။ | 25 ℃ | 60 မိနစ် | အပူ |
Ultimate Vacuum |
| 25 ℃ | 300 မိနစ် | ကိုင်ပါ။ |
2. အထက်ပါ lyophilization လုပ်ငန်းစဉ်သည် ကိုးကားရန်အတွက်သာဖြစ်သည်။မတူညီသော ထုတ်ကုန်အမျိုးအစားများနှင့် မတူညီသော အအေးခံစက်များတွင် မတူညီသော ကန့်သတ်ချက်များရှိသည်၊ ထို့ကြောင့် ပြုပြင်ပြောင်းလဲမှုများကို အမှန်တကယ်ပြုလုပ်နိုင်သည်။အသုံးပြုနေစဉ်အတွင်းအခြေအနေများ။
3. မတူညီသော lyophilization လုပ်ငန်းစဉ်များသည် lyophilized ၏ မတူညီသော အသုတ်အရွယ်အစားများအတွက် သင့်လျော်နိုင်ပါသည်။ထုတ်ကုန်များ၊ ထို့ကြောင့် အကြီးစားထုတ်လုပ်မှုအတွက် အသုံးပြုသည့်အခါ လုံလောက်သော စမ်းသပ်မှု မှန်ကန်မှုကို လုပ်ဆောင်ရပါမည်။
Lyophilize အသုံးပြုရန်ညွှန်ကြားချက်ဃ အမှုန့်
1. lyophilized အမှုန့်ကို အကျဉ်းချုံးပြီး ဗဟိုပြုပါ။
2. nucleic acid ပုံစံခွက်ကို lyophilized အမှုန့်ထဲသို့ထည့်ကာ 25µL အထိ ရေထည့်ပါ။
3. centrifugation ဖြင့် ကောင်းစွာရောမွှေပြီး စက်ပေါ်တွင် လည်ပတ်ပါ။
အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု-
1. လုပ်ငန်းဆောင်တာ စမ်းသပ်ခြင်း- အာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ တိကျမှု၊ qPCR ၏ ပြန်ပွားနိုင်မှု။
2. exogenous nuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိ၊ exogenous endo/exonuclease ညစ်ညမ်းမှု မရှိခြင်း။
နည်းပညာဆိုင်ရာ အချက်အလက်-
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG သည် 1~5 မိနစ်အတွင်း လျှင်မြန်စွာ စတင်နိုင်သော hot-start အင်ဇိုင်းကို အသုံးပြုပါသည်။အထူးကြားခံဖော်မြူလာအားဖြင့် ၎င်းသည် multiplex fluorescent quantitative PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် သင့်လျော်သည်။
2. ၎င်းတွင် fluorescence quantitative PCR limit detection ၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို သိသိသာသာ တိုးမြင့်လာစေသည့်၊ ချဲ့ထွင်ထားသော မျဉ်းကွေးများကို ပုံမှန်ဖြစ်စေရန်၊ fluorescence value သည် အာရုံခံမှုနည်းသော templates များတွင် သိသာထင်ရှားစွာ တိုးတက်မှုကို ရရှိသည်၊၊ မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်း fluorescence quantitative PCR detection reagents များအဖြစ် သင့်လျော်ပါသည်။
3. အပူချိန်နိမ့်သော သို့မဟုတ် 200bp အပိုင်းအစများထက် ပိုရှည်သော primer များအတွက်၊ အဆင့် 3 နည်းလမ်းကို အကြံပြုထားသည်။
4. dUTP ၏အသုံးချမှုထိရောက်မှုနှင့် UNG အင်ဇိုင်းအပေါ် အာရုံခံနိုင်စွမ်းသည် မတူညီသောပစ်မှတ်မျိုးဗီဇများအတွက် ကွဲပြားသည်၊ ထို့ကြောင့် UNG စနစ်ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြင့် ထောက်လှမ်းသိရှိနိုင်မှု လျော့နည်းသွားပါက၊ တုံ့ပြန်မှုစနစ်အား ချိန်ညှိပြီး အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် လုပ်ဆောင်သင့်သည်။နည်းပညာပံ့ပိုးမှုလိုအပ်ပါက ကျွန်ုပ်တို့၏ကုမ္ပဏီသို့ ဆက်သွယ်ပါ။
5. အသံချဲ့ထွင်ခြင်းမပြုမီနှင့် ပြီးနောက် သီးသန့်နေရာများနှင့် ပိုက်ပိုက်များကို အသုံးပြုပါ၊ ခွဲစိတ်မှုအတွင်း လက်အိတ်များကို ဝတ်ဆင်ကာ မကြာခဏ အစားထိုးပါ။PCR ပြီးစီးပြီးနောက် တုံ့ပြန်မှုပြွန်ကို PCR ထုတ်ကုန်များမှ နမူနာများ ညစ်ညမ်းမှုအနည်းဆုံးဖြစ်အောင် မဖွင့်ပါနှင့်။
