Proteinase K NGS (အမှုန့်)
ကြောင်နံပါတ် HC4507A
NGS Protease K သည် မြင့်မားသောအင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်နှင့် ကျယ်ပြန့်သောအလွှာ၏ထူးခြားမှုရှိသောတည်ငြိမ်သော serine protease တစ်ခုဖြစ်သည်။ အဆိုပါအင်ဇိုင်းသည် hydrophobic amino acids ၏ C-terminal၊ hydrophobic amino acids၊ ဆာလဖာပါဝင်သောအမိုင်နိုအက်ဆစ်နှင့် aromatic amino acids များ၏ C-terminal နှင့်ကပ်လျက်တွင်ရှိသော ester bonds များနှင့် peptide bonds များကို ဦးစားပေးအားဖြင့် ချေဖျက်ပေးပါသည်။ထို့ကြောင့်၊ ပရိုတင်းများကို တိုတောင်းသော peptides အဖြစ်သို့ ကျဆင်းစေရန် မကြာခဏ အသုံးပြုသည်။NGS Protease K သည် Asp ပါရှိသော ပုံမှန် serine protease ဖြစ်သည်။39-သူ့69-Ser၂၂၄serine proteases များ၏ထူးခြားသောဓာတ်ပစ္စည်းများ triad နှင့်ဓာတ်ကူပစ္စည်းစင်တာကိုဆွဲငင် Ca ဖြင့်ဝိုင်းရံထားသည်။2+ပိုမိုကျယ်ပြန့်သော အခြေအနေများအောက်တွင် မြင့်မားသော အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်ကို ထိန်းသိမ်းထားရန် တည်ငြိမ်မှုအတွက် ချိတ်ဆက်ထားသောနေရာများ။
သတ်မှတ်ချက်
| အသွင်အပြင် | အဖြူမှ အဖြူအဆင်းအမှုန်အမွှားအမှုန့်၊ lyophilized |
| တိကျသောလှုပ်ရှားမှု | ≥40U/mg အစိုင်အခဲ |
| DNase | မတွေ့ပါ။ |
| RNase | မတွေ့ပါ။ |
| Bioburden | ≤50CFU/g အစိုင်အခဲ |
| Nucleic acid အကြွင်းအကျန် | <5pg/mg အစိုင်အခဲ |
သတ္တိ
| အရင်းအမြစ် | Tritirachium အယ်လ်ဘမ် |
| EC နံပါတ် | ၃.၄.၂၁.၆၄(Tritirachium အယ်လ်ဘမ်မှ ပြန်လည်ပေါင်းစပ်သည်) |
| မော်လီကျူးအလေးချိန် | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric အမှတ် | 7.81 ပုံ.၁ |
| အကောင်းဆုံး pH | 7.0-12.0 (အားလုံးသည် မြင့်မားသောလုပ်ဆောင်ချက်ကို လုပ်ဆောင်သည်) ပုံ.၂ |
| အကောင်းဆုံးအပူချိန် | 65℃ ပုံ.၃ |
| pH တည်ငြိမ်မှု | pH 4.5-12.5 (25℃၊16h) ပုံ.၄ |
| အပူတည်ငြိမ်မှု | 50 ℃ အောက် (pH 8.0၊ 30 မိနစ်) ပုံ.၅ |
| သိုလှောင်မှုတည်ငြိမ်မှု | 25 ℃ တွင် 12 လကြာသိမ်းဆည်းထားသည်။ |
| Activators များ | SDS, ယူရီးယား |
| တားဆေးများ | Diisopropyl fluorophosphate;benzylsulfonyl ဖလိုရိုက် |
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
lyophilized အမှုန့်ကို -25~-15 ℃ အလင်းနှင့်အကြာကြီးဝေးဝေးတွင် သိမ်းဆည်းပါ။ဖျက်သိမ်းပြီးနောက်၊ အလင်းမှ 2-8 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်အကွာအဝေးတွင်ရေတိုသိုလှောင်မှုအတွက်သင့်လျော်သောအသံအတိုးအကျယ်သို့ aliquot သို့မဟုတ် အလင်းမှ -25 ~ - 15 ℃တွင်ရေရှည်သိုလှောင်မှု။
ကြိုတင်သတိပေးချက်များ
အသုံးပြုသည့်အခါ သို့မဟုတ် အလေးချိန်ချိန်သည့်အခါ အကာအကွယ်လက်အိတ်များနှင့် မျက်မှန်များကို ဝတ်ဆင်ပြီး အသုံးပြုပြီးနောက် လေဝင်လေထွက်ကောင်းအောင်ထားပါ။ဤထုတ်ကုန်သည် အရေပြားဓာတ်မတည့်မှုတုံ့ပြန်မှုနှင့် ပြင်းထန်သောမျက်လုံးယားယံမှုကို ဖြစ်စေနိုင်သည်။ရှူသွင်းမိပါက ဓာတ်မတည့်ခြင်း သို့မဟုတ် ပန်းနာရင်ကျပ်ရောဂါ သို့မဟုတ် အသက်ရှူကျပ်ခြင်းတို့ကို ဖြစ်စေနိုင်သည်။အသက်ရှုလမ်းကြောင်းကို ယားယံစေနိုင်ပါတယ်။
ယူနစ် အဓိပ္ပါယ်
NGS Protease K ၏ တစ်ယူနစ်ကို စံသတ်မှတ်ထားသော အခြေအနေများအောက်တွင် casein ကို 1 μmol L-tyrosine အဖြစ် ဟိုက်ဒရိုဂျင်ဖြစ်စေရန် လိုအပ်သော အင်ဇိုင်းပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်သည်။
ဓာတ်ပစ္စည်းများ ပြင်ဆင်ခြင်း။
| ဓါတ်ဆေး | ထုတ်လုပ်သူ | ကက်တလောက် |
| Casein နည်းပညာပိုင်းနွားနို့မှ | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၁၀၀၁၉၇၆၂ |
| NaH2PO4· 2 နာရီ2O | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၂၀၀၄၀၇၁၈ |
| Na2HPO4 | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၂၀၀၄၀၆၁၈ |
| Trichloroacetic အက်ဆစ် | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၈၀၁၃၂၆၁၈ |
| ဆိုဒီယမ် acetate | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၁၀၀၁၈၈၁၈ |
| အက်ဆစ်အက်ဆစ် | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၁၀၀၀၀၂၁၈ |
| HCl | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၁၀၀၁၁၀၁၈ |
| ဆိုဒီယမ်ကာဗွန်နိတ် | Sinopharm ဓာတုပစ္စည်းReagent Co., Ltd. | ၁၀၀၁၉၂၆၀ |
| ဖောလိုင်း-ဖီနော | Sangon Biotech (ရှန်ဟိုင်း)ကုမ္ပဏီလီမိတက်။ | A500467-0100 |
| L-tyrosine | Sigma | ၉၃၈၂၉ |
ဓါတ်ဆေး I-
အလွှာ- နွားနို့ရည်မှ 1% Casein- 1g နွားနို့ casein 1g ကို 0.1M sodium phosphate solution, pH 8.0 တွင် 50ml အရည်ဖျော်ပြီး 65-70°C တွင် ရေချိုးပြီး 15 မိနစ်ကြာ အပူပေးပြီး မွှေကာ အရည်ဖျော်ကာ ရေဖြင့် အအေးခံကာ ချိန်ညှိပေးသည်။ ဆိုဒီယမ်ဟိုက်ဒရောဆိုဒ်ကို pH 8.0 သို့ 100ml တွင် အရောဖြင့်ရောပါ။
Reagent II-
TCA ဖြေရှင်းချက်- 0.1M trichloroacetic acid၊ 0.2M sodium acetate နှင့် 0.3M acetic acid (အလေးချိန် 1.64g trichloroacetic acid + 1.64g sodium acetate + 1.724mL acetic acid ဆက်တိုက်၊ 50mL deionized water ထည့်ပြီး HCl မှ 4.0 နှင့် p3H သို့ ချိန်ညှိပါ 100ml)။
Reagent III-
0.4m ဆိုဒီယမ်ကာဗွန်နိတ်ဖြေရှင်းချက် (4.24g မဟိုက်ဒရိတ်ဆိုဒီယမ်ကာဗွန်နိတ်အလေးချိန်နှင့် 100mL ရေတွင်ပျော်သည်)
Reagent IV-
Folin phenol ဓါတ်ပြုခြင်း- deionized water ဖြင့် 5 ကြိမ် ရောမွှေပါ။
Reagent V-
အင်ဇိုင်းဒြပ်စင်- 0.1 M ဆိုဒီယမ်ဖော့စဖိတ်ဖြေရှင်းချက်၊ pH 8.0။
Reagent VI-
L-tyrosine စံဖြေရှင်းချက်-0၊ 0.005၊ 0.025၊ 0.05၊ 0.075၊ 0.1၊ 0.25 umol/ml L-tyrosine 0.2M HCl နှင့် ပျော်ဝင်သည်။
လုပ်ထုံးလုပ်နည်း
1. UV-Vis spectrophotometer ကိုဖွင့်ပြီး ဓာတ်ပုံမက်ထရစ်တိုင်းတာမှုကို ရွေးချယ်ပါ။
2. လှိုင်းအလျားကို 660nm အဖြစ် သတ်မှတ်ပါ။
3. ရေချိုးခန်းကိုဖွင့်ပါ၊ အပူချိန် 37 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်ထားကာ အပူချိန်မပြောင်းလဲကြောင်း သေချာစေရန် 3-5 မိနစ်ခန့်ထားပါ။
4. 0.5 မီလီမီတာ အလွှာကို 37 ℃ ရေချိုးသည့်နေရာတွင် 2mL centrifuge tube တွင် 10 မိနစ်ကြာအပူပေးပါ။
5. 0.5mL ရှိသော အင်ဇိုင်းဖျော်ရည်ကို ကြိုပြီး အပူပေးထားသော centrifuge ပြွန်ထဲသို့ 10 မိနစ်ကြာ ထုတ်ယူပါ။အင်ဇိုင်းအရောအနှောကို အလွတ်အုပ်စုအဖြစ် သတ်မှတ်ပါ။
6. တုံ့ပြန်မှုပြီးပြီးချင်း 1.0 mL TCA ဓါတ်ပေါင်းထည့်ပါ။နှံ့အောင်ရောပြီး ရေချိုးပြီး မိနစ် 30 လောက်ထားပါ။
7. Centrifugate တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်။
8. သတ်မှတ်ထားသော အစီအစဥ်တွင် အောက်ပါ အစိတ်အပိုင်းများကို ထည့်ပါ။
| ဓါတ်ဆေး | အတွဲ |
| Supernatant | 0.5 mL |
| 0.4M ဆိုဒီယမ်ကာဗွန်နိတ် | 2.5 မီလီမီတာ |
| Folin phenol ဓာတ်ပစ္စည်းများ | 0.5 mL |
9. ရေမချိုးခင် 37 ℃ ဖြင့် မိနစ် 30 ခန့် မွှေပါ။
10. OD၆၆၀OD အဖြစ် သတ်မှတ်ခဲ့သည်။1;အလွတ်ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စု- OD ကိုဆုံးဖြတ်ရန် အင်ဇိုင်းအပျော့စားကို အင်ဇိုင်းဖြေရှင်းချက်အစားထိုးရန် အသုံးပြုသည်။၆၆၀OD အဖြစ်2, ΔOD=OD1-OD2.
11. L-tyrosine စံမျဉ်းကွေး- 0.5mL ကွဲပြားသော အာရုံစူးစိုက်မှု L-tyrosine ဖြေရှင်းချက်၊ 2.5mL 0.4M ဆိုဒီယမ်ကာဗွန်နိတ်၊ 0.5mL ဖောလင်းဖီနောဓာတ် 5mL စင်ထရစ်ဖန်ပြွန်အတွင်း 37°C တွင် သားဖောက်ပြီး 30မိနစ်ကြာ၊ OD ကိုရှာဖွေပါ။၆၆၀L-tyrosine ၏ မတူညီသော အာရုံစူးစိုက်မှု အတွက်၊ ထို့နောက် စံမျဉ်းကွေး Y=kX+b ကိုရရှိသည်၊ ထို့နောက် Y သည် L-tyrosine အာရုံစူးစိုက်မှု နေရာတွင် X သည် OD ဖြစ်သည်။၆၀၀.
တွက်ချက်မှု
2- စုစုပေါင်းတုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်ပမာဏ (mL)
0.5- အင်ဇိုင်းဖြေရှင်းချက် ပမာဏ (mL)
0.5- chromogenic ဆုံးဖြတ်ချက် (mL) တွင် အသုံးပြုသည့် တုံ့ပြန်မှု အရည်ပမာဏ
10- တုံ့ပြန်ချိန် (မိနစ်)
Df: Dilution မျိုးစုံ
C- အင်ဇိုင်းပြင်းအား (mg/mL)
ကိန်းဂဏန်းများ
ပုံ.၁ DNA အကြွင်းအကျန်
| နမူနာ | ရိပ်သာ၊ C4 | Nucleic Acid ၊ ပြန်လည်ရယူခြင်း (pg/mg) | ပြန်လည်ရယူခြင်း(%) | စုစုပေါင်း Nucleic အက်ဆစ် ( pg/mg) |
| PRK | ၂၄.၆၆ | ၂.၂၃ | ၈၃% | ၂.၆၈၇ |
| PRK+STD2 | ၁၈.၇၂၃ | ၁၂၆,၇၂၈ | — | — |
| STD1 | ၁၂,၉၅၅ |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | ၁၉။၁၂၅ | |||
| STD4 | ၂၃၊၁၃၅ | |||
| STD5 | ၂၆၊၆၂၅ | |||
| RNA-အခမဲ့ H2O | အတိအကျ မသိရသေးပါ။ | — | — | — |
ပုံ.၂ အကောင်းဆုံး pH
ပုံ.၃ အကောင်းဆုံးအပူချိန်
ပုံ.၄ pH တည်ငြိမ်မှု
Fig.5 အပူတည်ငြိမ်မှု
ပုံ.၆ သိုလှောင်မှုတည်ငြိမ်မှု 25 ℃
