ပရိုတင်းဓာတ် K (အရည်)
ကြောင်နံပါတ် HC4502A
Proteinase K သည် ကျယ်ပြန့်သော အလွှာ၏ တိကျသော တည်ငြိမ်သော serine protease ဖြစ်သည်။၎င်းသည် ဆပ်ပြာများပါဝင်သည့်တိုင် မူလပြည်နယ်ရှိ ပရိုတင်းများစွာကို ပြိုကွဲစေသည်။ပုံဆောင်ခဲနှင့် မော်လီကျူးဖွဲ့စည်းပုံဆိုင်ရာ လေ့လာမှုများမှ အထောက်အထားများအရ အဆိုပါအင်ဇိုင်းသည် တက်ကြွသော site catalytic triad (Asp၊39-သူ့69- ဆာ၂၂၄)ခွဲထွက်ခြင်း၏ ထင်ရှားသောနေရာသည် ပိတ်ဆို့ထားသော အယ်လ်ဖာအမိုင်နိုအုပ်စုများပါရှိသော ကာဘောက်စ်နှင့် အနံ့ရှိသော အမိုင်နိုအက်ဆစ်အုပ်စုနှင့် ကပ်လျက်ရှိသော peptide နှောင်ကြိုးဖြစ်သည်။၎င်း၏ကျယ်ပြန့်မှုအတွက် အသုံးများသည်။တိကျမှု။
သတ်မှတ်ချက်
| အသွင်အပြင် | အရောင်မရှိသော အရည်မှ အညိုဖျော့ |
| လုပ်ဆောင်ချက် | ≥800 U/ml |
| ပရိုတိန်းအာရုံစူးစိုက်မှု | ≥20 mg/ml |
| DNase | မတွေ့ပါ။ |
| RNase | မတွေ့ပါ။ |
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
အပူချိန် 2-8 ℃ တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
သတ္တိ
| EC နံပါတ် | 3.4.21.64 (RTritirachium အယ်လ်ဘမ်မှ ပေါင်းစပ်ထားသော) |
| မော်လီကျူးအလေးချိန် | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric အမှတ် | ၇.၈၁ |
| အကောင်းဆုံး pH | 7.0-12.0 ပုံ.၁ |
| အကောင်းဆုံးအပူချိန် | 65 ℃ Fig.2 |
| pH တည်ငြိမ်မှု | pH 4.5-12.5 (25 ℃၊ 16 နာရီ) ပုံ.၃ |
| အပူတည်ငြိမ်မှု | 50 ℃အောက် (pH 8.0၊ 30 မိနစ်) ပုံ.၄ |
| Activators များ | SDS, ယူရီးယား |
| တားဆေးများ | Diisopropyl fluorophosphate;phenylmethylsulfonyl ဖလိုရိုက် |
လျှောက်လွှာများ
1. မျိုးရိုးဗီဇရောဂါရှာဖွေရေးကိရိယာအစုံ
2. RNA နှင့် DNA ထုတ်ယူမှုသေတ္တာများ
3. တစ်ရှူးများမှ ပရိုတင်းမဟုတ်သော အစိတ်အပိုင်းများကို ထုတ်ယူခြင်း၊ DNA ကာကွယ်ဆေးများ နှင့် heparin ကဲ့သို့သော ပရိုတင်းအညစ်အကြေးများကို ပြိုကွဲစေခြင်း၊
4. pulsed electrophoresis ဖြင့် chromosome DNA ကို ပြင်ဆင်ခြင်း။
5. အနောက်တိုင်းစိတ်ကျဉ်းကြပ်
6. Enzymatic glycosylated albumin ဓာတ်များကို ဗီထရိုရောဂါရှာဖွေခြင်းတွင်၊
ကြိုတင်သတိပေးချက်များ
အသုံးပြုသည့်အခါ သို့မဟုတ် အလေးချိန်ချိန်သည့်အခါ အကာအကွယ်လက်အိတ်များနှင့် မျက်မှန်များကို ဝတ်ဆင်ပြီး အသုံးပြုပြီးနောက် လေဝင်လေထွက်ကောင်းအောင်ထားပါ။ဤထုတ်ကုန်သည် အရေပြားဓာတ်မတည့်မှုတုံ့ပြန်မှုနှင့် ပြင်းထန်သောမျက်လုံးယားယံမှုကို ဖြစ်စေနိုင်သည်။ရှူသွင်းမိပါက ဓာတ်မတည့်ခြင်း သို့မဟုတ် ပန်းနာရင်ကျပ်ရောဂါ သို့မဟုတ် အသက်ရှူကျပ်ခြင်းတို့ကို ဖြစ်စေနိုင်သည်။အသက်ရှုလမ်းကြောင်းကို ယားယံစေနိုင်ပါတယ်။
ဆန်းစစ်ချက်
ယူနစ် အဓိပ္ပါယ်
တစ်ယူနစ် (U) ကို အောက်ပါအခြေအနေများအောက်တွင် တစ်မိနစ်လျှင် 1 μmol tyrosine ထုတ်လုပ်ရန် casein hydrolyze လိုအပ်သော အင်ဇိုင်းပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်သည်။
ဓာတ်ပစ္စည်းများ ပြင်ဆင်ခြင်း။
Reagent I- နို့ 1g casein ကို 0.1M sodium phosphate solution (pH 8.0) ၏ 50ml တွင် ပျော်ဝင်ပြီး 65-70 ℃ ရေတွင် 15 မိနစ်ကြာ ပေါက်အောင်မွှေကာ ပျော်ဝင်ကာ ရေဖြင့် အအေးခံကာ ဆိုဒီယမ်ဟိုက်ဒရောဆိုဒ် pH8.0 သို့ ချိန်ညှိကာ ပုံသေ၊ ပမာဏ 100ml ။
ဓာတ်ပစ္စည်း II- TCA ဖြေရှင်းချက်- 0.1M trichloroacetic အက်ဆစ်၊ 0.2M ဆိုဒီယမ်အက်ဆစ်၊ 0.3M acetic အက်ဆစ်။
Reagent III: 0.4M Na2CO3ဖြေရှင်းချက်။
Reagent IV - Forint reagent ကို ရေသန့်သန့်ဖြင့် ၅ ကြိမ် ရောမွှေပါ။
ဓာတ်ပြုခြင်း V- အင်ဇိုင်းမှေးမှိန်- 0.1M ဆိုဒီယမ်ဖော့စဖိတ်ဖြေရှင်းချက် (pH 8.0)။
Reagent VI- Tyrosine solution:0၊ 0.005၊ 0.025၊ 0.05၊ 0.075၊ 0.1၊ 0.25 umol/ml tyrosine 0.2M HCl ဖြင့် ပျော်ဝင်ခြင်း။
လုပ်ထုံးလုပ်နည်း
1. 0.5ml of I reagent ကို 37 ℃ တွင် ကြိုတင်ပူထားပြီး 0.5ml of enzyme solution ကို ရောမွှေပြီး 37 ℃ တွင် 10 မိနစ်ကြာ ဖုတ်ပါ။
2. တုံ့ပြန်မှုကိုရပ်တန့်ရန် 1ml of reagent II ကို ပေါင်းထည့်ကာ ကောင်းစွာရောမွှေပြီး ပေါက်ဖွားမှုကို မိနစ် 30 ကြာ ဆက်လက်ပြုလုပ်ပါ။
3. Centrifugate တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်။
4. 0.5ml supernatant ကိုယူ၍ 2.5ml reagent III, 0.5ml reagent IV ကိုထည့်ကာ ကောင်းစွာရောမွှေပြီး 37 ℃ တွင် မိနစ် 30 ကြာ ဖုတ်ပါ။
5. OD၆၆၀OD အဖြစ် သတ်မှတ်ခဲ့သည်။1;အလွတ်ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စု- OD ကိုဆုံးဖြတ်ရန် အင်ဇိုင်းဖြေရှင်းချက်အစားထိုးရန်အတွက် 0.5ml ဓါတ်ဆား V ကိုအသုံးပြုသည်။၆၆၀OD အဖြစ်2, ΔOD=OD1-OD2.
6. L-tyrosine စံမျဉ်းကွေး- 0.5mL ကွဲပြားသော အာရုံစူးစိုက်မှု L-tyrosine ဖြေရှင်းချက်၊ 2.5mL Reagent III၊ 5mL centrifuge tube တွင် 0.5mL Reagent IV၊ 37℃ တွင် ပေါက်ဖွားပြီး မိနစ် 30 ကြာ၊ OD ကို ရှာဖွေပါ။၆၆၀L-tyrosine ၏ မတူညီသော အာရုံစူးစိုက်မှု အတွက်၊ ထို့နောက် Y သည် L-tyrosine အာရုံစူးစိုက်မှု ရှိရာ စံမျဉ်းကွေး Y=kX+b ကို ရရှိသည်၊ X သည် OD ဖြစ်သည်။၆၀၀.
တွက်ချက်မှု
2- စုစုပေါင်းတုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်ပမာဏ (mL)
0.5- အင်ဇိုင်းဖြေရှင်းချက် ပမာဏ (mL)
0.5- chromogenic ဆုံးဖြတ်ချက် (mL) တွင် အသုံးပြုသည့် တုံ့ပြန်မှု အရည်ပမာဏ
10- တုံ့ပြန်ချိန် (မိနစ်)
Df: Dilution မျိုးစုံ
C- အင်ဇိုင်းပြင်းအား (mg/mL)
ကိုးကား
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett(၁၉၇၂);၂၃:၇၇။
2. Wieger U & Hilz H. Biochem ။ဇီဝရုပ်များ။Res.ကွန်မြူနတီ(၁၉၇၁);၄၄:၅၁၃။
3. Hilz, H.et al.၊အီးယူအာရ်။J. Biochem(၁၉၇၅);၅၆:၁၀၃–၁၀၈။
4. Sambrook Jet အယ်လ်။၊ မော်လီကျူးပုံတူပွားခြင်း- ဓာတ်ခွဲခန်းလက်စွဲ၊ 2nd ထုတ်ဝေမှု၊ Cold Spring Harbor Laboratory Press၊ Cold Spring Harbor (1989)။
ကိန်းဂဏန်းများ
သဖန်းသီး. 1 အကောင်းဆုံး pH
100mM ကြားခံဖြေရှင်းချက်- pH6.0-8.0၊ Na-phosphate;pH8.0- 9.0၊ Tris-HCl;pH9.0-12.5၊ Glycine-NaOH။ အင်ဇိုင်းပြင်းအား- 1mg/mL
ပုံ။ 2 အကောင်းဆုံးအပူချိန်
20mM K-phosphate ကြားခံ pH 8.0 တွင် တုံ့ပြန်မှု။အင်ဇိုင်းပြင်းအား- 1mg/mL
ပုံ။ 3 pH တည်ငြိမ်မှု
25 ℃၊ 16 နာရီ 50mM ကြားခံဖြေရှင်းချက်ဖြင့် ကုသခြင်း- pH 4.5-5.5၊ Acetate;pH 6.0-8.0၊ Na-phosphate;pH 8.0-9.0၊ Tris-HClpH 9.0-12.5၊ Glycine-NaOH။အင်ဇိုင်းပြင်းအား- 1mg/mL
ပုံ 4 အပူ တည်ငြိမ်မှု
50mM Tris-HCl ကြားခံ၊ pH 8.0 ဖြင့် မိနစ် 30 ကုသမှု။အင်ဇိုင်းပြင်းအား- 1mg/mL
ပုံ။ 5 သိုလှောင်မှု တည်ငြိမ်သည်။ty at 25 ℃
