2×PCR Master Mix (ဆိုးဆေးမပါဘဲ)
PCR Master Mix သည် Taq DNA Polymerase၊ dNTP ရောနှော MgCl2 နှင့် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသော ကြားခံများ အပါအဝင် သမားရိုးကျ PCR ရောစပ်ထားသော ဖြေရှင်းချက်တစ်မျိုးဖြစ်သည်။တုံ့ပြန်မှုအတွင်း၊ ချဲ့ထွင်ရန်အတွက် primer နှင့် template ကိုသာထည့်နိုင်ပြီး၊ စမ်းသပ်မှု၏လုပ်ဆောင်မှုအဆင့်များကို လွန်စွာရိုးရှင်းစေသည်။ဤထုတ်ကုန်တွင် အလွန်ကောင်းမွန်သော တည်ငြိမ်မှုပါဝင်ပြီး 4°C တွင် 3 လကြာသိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။PCR ထုတ်ကုန်တွင် 3′-dA protrusion ပါရှိပြီး T vector တွင် အလွယ်တကူ ပုံတူပွားနိုင်သည်။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန်ကို -25 ℃ ~ -15 ℃ တွင် နှစ်နှစ်ကြာ သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
သတ်မှတ်ချက်များ
| သစ္စာရှိမှု (vs.Taq) | 1× |
| ဟော့စတင် | No |
| Overhang | 3′-A |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| တုံ့ပြန်မှုပုံစံ | SuperMix သို့မဟုတ် Master Mix |
| တုံ့ပြန်မှုအရှိန် | စံ |
| ထုတ်ကုန်အမျိုးအစား | PCR Master Mix (2×) |
ညွှန်ကြားချက်များ
၁။တုံ့ပြန်မှုစနစ်
| အစိတ်အပိုင်းများ | အရွယ်အစား (μL) |
| နမူနာပုံစံ DNA | သင့်လျော်သည်။ |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | 50 သို့ |
2.ချဲ့ထွင်မှု ပရိုတိုကော
| သံသရာခြေလှမ်းများ | အပူချိန် (°C) | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
| အကြို denaturation | 94 ℃ | ၅ မိနစ် | 1 |
| Denaturation | 94 ℃ | 30 စက္ကန့် | 35 |
| ဖြာထွက်ခြင်း။ | 50-60 ℃ | 30 စက္ကန့် | |
| တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | 30-60sec/kb | |
| နောက်ဆုံး တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | ၁၀ မိနစ် | 1 |
မှတ်စုများ-
1) နမူနာပုံစံအသုံးပြုမှု- 50-200 ng genomic DNA၊0.1- 10 ng plasmid DNA ။
2) မောင်2+အာရုံစူးစိုက်မှု- ဤထုတ်ကုန်တွင် PCR တုံ့ပြန်မှုအများစုအတွက် သင့်လျော်သော MgCl2 3 mM ပါရှိသည်။
3) Annealing temperature- Primers ၏ သီအိုရီ Tm တန်ဖိုးကို ကျေးဇူးပြု၍ ကိုးကားပါ။လိမ်းထားသောအပူချိန်သည် primer ၏သီအိုရီတန်ဖိုးထက် 2-5 ℃နိမ့်သည်ဟုသတ်မှတ်နိုင်သည်။
4) တိုးချဲ့ချိန်- မော်လီကျူးသတ်မှတ်ခြင်းအတွက် 30 sec/kb ကို အကြံပြုထားသည်။မျိုးဗီဇပွားခြင်းအတွက်၊ 60sec/kb ကို အကြံပြုထားသည်။
မှတ်စုများ
၁။သင့်ဘေးကင်းရေးနှင့် ကျန်းမာရေးအတွက် ကျေးဇူးပြု၍ ခွဲစိတ်ခန်းသုံး အင်္ကျီများနှင့် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များ ဝတ်ဆင်ပါ။
၂။သုတေသနအတွက်သာ အသုံးပြုပါ။
