Universal SYBR GREEN qPCR Premix (အပြာ)

ကြောင်နံပါတ်- HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) သည် မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် တိကျမှုဖြင့် လက္ခဏာရပ်ပြသော 2× real-time quantitative PCR ချဲ့ထွင်မှုအတွက် အကြိုဖြေရှင်းချက်တစ်ခုဖြစ်ပြီး အရောင်အနေဖြင့် အပြာဖြစ်ပြီး နမူနာထပ်တိုးခြေရာခံခြင်း၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသည်။နမူနာပြင်ဆင်မှုအတွင်း primer annealing ကြောင့် ပင်မအစိတ်အပိုင်း Taq DNA polymerase သည် antibody hot start ကိုအသုံးပြုပြီး တိကျသောမဟုတ်သောချဲ့ထွင်မှုကို ထိရောက်စွာတားဆီးထားသည်။တစ်ချိန်တည်းမှာပင်၊ ဖော်မြူလာသည် PCR တုံ့ပြန်မှု၏ ချဲ့ထွင်မှုစွမ်းဆောင်ရည်ကို မြှင့်တင်ရန်နှင့် မတူညီသော GC ပါဝင်မှုများ (30 ~ 70%) နှင့် မျိုးဗီဇများ ချဲ့ထွင်မှုကို ညီမျှစေရန် မြှင့်တင်ပေးသည့်အချက်များကို ပေါင်းထည့်သည်၊ ထို့ကြောင့် ပမာဏ PCR သည် ကျယ်ပြန့်သော ပမာဏဖြင့် ကောင်းမွန်သော linear ဆက်ဆံရေးကို ရရှိနိုင်သည်။ ဒေသ။ဤထုတ်ကုန်တွင် qPCR တူရိယာအများစုအတွက်အသုံးပြုနိုင်သည့် အထူး ROX Passive Reference Dye ပါရှိသည်။မတူညီသောတူရိယာများတွင် ROX ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကိုချိန်ညှိရန်မလိုအပ်ပါ။အသံချဲ့စက်အတွက် တုံ့ပြန်မှုစနစ်ပြင်ဆင်ရန်အတွက် primers နှင့် templates များထည့်ရန်သာ လိုအပ်ပါသည်။

အစိတ်အပိုင်းများ

Universal Blue qPCR Master Mix

သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ

ထုတ်ကုန်ကို ရေခဲအိတ်များဖြင့် ပို့ဆောင်ထားပြီး -25 ℃ ~ 15 ℃ တွင် 18 လကြာ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။တုံ့ပြန်မှုစနစ်အား သိုလှောင်ခြင်း သို့မဟုတ် ပြင်ဆင်သည့်အခါတွင် ပြင်းထန်သောအလင်းရောင်ရောင်ခြည်ဖြာထွက်ခြင်းကို ရှောင်ရှားရန် လိုအပ်ပါသည်။

သတ်မှတ်ချက်

ညွှန်ကြားချက်များ

1.Reaction စနစ်

[မှတ်ချက်]- ပြင်းထန်စွာလှုပ်ရမ်းခြင်းမှ ကင်းဝေးစေရန် အသုံးမပြုမီ သေချာစွာရောမွှေပါ။

က) Primer အာရုံစူးစိုက်မှု- နောက်ဆုံး primer အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 0.2μmol/L ဖြစ်ပြီး 0.1 နှင့် 1.0μmol/L ကြားကိုလည်း သင့်လျော်သလို ချိန်ညှိနိုင်သည်။

b) Template အာရုံစူးစိုက်မှု- ပုံစံပလိတ်သည် မကြေညက်သော cDNA စတော့ရှယ်ယာဖြေရှင်းချက်ဖြစ်ပါက၊ အသုံးပြုသည့်ပမာဏသည် qPCR တုံ့ပြန်မှု၏ စုစုပေါင်းထုထည်၏ 1/10 ထက် မကျော်လွန်သင့်ပါ။

ဂ) Template dilution- cDNA စတော့ရှယ်ယာဖြေရှင်းချက်ကို 5-10 ကြိမ်ဖြင့် ရောမွှေရန် အကြံပြုထားသည်။ချဲ့ထွင်မှုမှရရှိသော Ct တန်ဖိုးသည် 20-30 cycles ရှိသောအခါတွင် ထည့်သွင်းထားသော template ၏ အကောင်းဆုံးပမာဏသည် ပိုမိုကောင်းမွန်ပါသည်။

ဃ) တုံ့ပြန်မှုစနစ်- ပစ်မှတ် ဗီဇချဲ့ထွင်မှု၏ ထိရောက်မှုနှင့် ထပ်တလဲလဲဖြစ်နိုင်မှုကို သေချာစေရန် 20μL သို့မဟုတ် 50μL ကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။

င) စနစ်ပြင်ဆင်မှု- အလွန်သန့်ရှင်းသောခုံတန်းလျားတွင် ပြင်ဆင်ပြီး နျူကလီးယားအကြွင်းအကျန်မရှိဘဲ အကြံပြုချက်များနှင့် တုံ့ပြန်မှုပြွန်များကို အသုံးပြုပါ။filter cartridges ပါသော အကြံပြုချက်များကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။ဖြတ်ကျော်ညစ်ညမ်းမှုနှင့် aerosol ညစ်ညမ်းမှုကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။

2.တုံ့ပြန်မှုအစီအစဉ်

စံအစီအစဉ်

အမြန်အစီအစဉ်

[မှတ်ချက်]- အမြန်ပရိုဂရမ်သည် ဗီဇအများစုအတွက် သင့်လျော်ပြီး စံပရိုဂရမ်များကို တစ်ဦးချင်းစီ ရှုပ်ထွေးသော အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံမျိုးဗီဇများအတွက် စံပရိုဂရမ်များကို စမ်းသပ်နိုင်သည်။

က) အပူချိန်နှင့် အချိန်ကို ဖျက်ခြင်း- primer ၏ ကြာချိန်နှင့် ပစ်မှတ် gene အလိုက် ချိန်ညှိပါ။

b) မီးချောင်းများ အချက်ပြရယူခြင်း (★)- ကျေးဇူးပြု၍ တူရိယာအသုံးပြုမှုအတွက် ညွှန်ကြားချက်ပါ လိုအပ်ချက်များနှင့်အညီ စမ်းသပ်လုပ်ထုံးလုပ်နည်းကို သတ်မှတ်ပါ။

ဂ) အရည်ပျော်မျဉ်းကွေး- တူရိယာမူလပရိုဂရမ်ကို ပုံမှန်အတိုင်းအသုံးပြုနိုင်သည်။

3. ရလဒ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း။ 

အရေအတွက်စမ်းသပ်မှုများအတွက် အနည်းဆုံး ဇီဝပုံတူသုံးမျိုး လိုအပ်သည်။တုံ့ပြန်မှုပြီးနောက်၊ အသံချဲ့စက်မျဉ်းကွေးနှင့် အရည်ပျော်မျဉ်းကြောင်း အတည်ပြုရန် လိုအပ်သည်။

3.1 ချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းကွေး-

စံချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းကွေးသည် S ပုံသဏ္ဍာန်ဖြစ်သည်။Ct တန်ဖိုး 20 နှင့် 30 ကြားတွင် ကျဆင်းသောအခါ အရေအတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုသည် အတိကျဆုံးဖြစ်သည်။ Ct တန်ဖိုးသည် 10 ထက်နည်းပါက၊ ပုံစံပလိတ်ကို မှေးမှိန်ပြီး စစ်ဆေးမှု ထပ်မံလုပ်ဆောင်ရန် လိုအပ်ပါသည်။Ct တန်ဖိုးသည် 30-35 အကြားရှိသောအခါ၊ ချဲ့ထွင်မှုထိရောက်မှုနှင့် ရလဒ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏တိကျမှုကိုသေချာစေရန်အတွက် ပုံစံပလိတ်အာရုံစူးစိုက်မှု သို့မဟုတ် တုံ့ပြန်မှုစနစ်၏ထုထည်ကို တိုးမြှင့်ရန် လိုအပ်ပါသည်။Ct တန်ဖိုးသည် 35 ထက်များသောအခါ၊ စမ်းသပ်မှုရလဒ်များသည် gene ၏ဖော်ပြမှုကို အရေအတွက်အားဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်သော်လည်း အရည်အသွေးပိုင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် အသုံးပြုနိုင်သည်။

3.2 အရည်ပျော်မျဉ်းကွေး-

အရည်ပျော်မျဉ်း၏ တစ်ခုတည်းသော အထွတ်အထိပ်သည် တုံ့ပြန်မှုတိကျမှုကောင်းမွန်ပြီး အရေအတွက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို လုပ်ဆောင်နိုင်သည်ကို ညွှန်ပြသည်၊အရည်ပျော်မျဉ်းကွေးသည် အထွတ်အထိပ်နှစ်ဆ သို့မဟုတ် အများအပြားကိုပြသပါက၊ ပမာဏခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို လုပ်ဆောင်၍မရပါ။အရည်ပျော်မျဉ်းကွေးသည် အထွတ်အထိပ်နှစ်ဆကိုပြသပြီး ပစ်မှတ်မဟုတ်သောအထွတ်အထိပ်သည် primer dimer သို့မဟုတ် DNA agarose gel electrophoresis ဖြင့် သီးခြားချဲ့ထွင်ခြင်းရှိ၊ မရှိ ဆုံးဖြတ်ရန် လိုအပ်သည်။၎င်းသည် primer dimer ဖြစ်ပါက၊ primer concentration ကိုလျှော့ချရန် သို့မဟုတ် primer များကို amplification efficiency မြင့်မားစွာဖြင့် ပြန်လည်ဒီဇိုင်းထုတ်ရန် အကြံပြုထားသည်။၎င်းသည် တိကျသောအသံချဲ့စက်မဟုတ်ပါက၊ ကျေးဇူးပြု၍ annealing အပူချိန်ကို တိုးမြှင့်ပါ သို့မဟုတ် primers များကို တိကျသောပုံစံဖြင့် ပြန်လည်ပြင်ဆင်ပါ။

မှတ်စုများ

သင့်ကျန်းမာရေးနှင့် ဘေးကင်းစေရန်အတွက် လိုအပ်သော PPE၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီနှင့် လက်အိတ်များကို ဝတ်ဆင်ပါ။

ဤထုတ်ကုန်သည် သုတေသနအတွက်သာ အသုံးပြုပါသည်။