Rnase A
Ribonuclease A(RNaseA) သည် 13.7 kDa ခန့်ရှိသော မော်လီကျူးအလေးချိန် 13.7 kDa ခန့်ရှိသော disulfide အနှောင်အဖွဲ့ 4 ခုပါရှိသော သောင်တင်ထားသော ပိုလီပရိုက်တစ်ခုဖြစ်သည်။RNase Ais သည် အထူးသဖြင့် သောင်တင်ထားသော RNA များကို C နှင့် U အကြွင်းအကျန်များတွင် ပြိုကွဲစေသည့် endoribonuclease တစ်ခုဖြစ်သည်။အတိအကျအားဖြင့်၊ ခွဲထုတ်မှုသည် နျူကလိယotide ၏ 5'-ribose နှင့် ကပ်လျက် pyrimidine nucleotide ၏ 3'-ribose ပေါ်ရှိ phosphodiester နှောင်ကြိုးကို အသိအမှတ်ပြုသည်၊ ထို့ကြောင့် 2,3'-Cyclic phosphates သည် 3 ဆီသို့ hydrolyzed ဖြစ်စေရန်၊ nucleoside phosphates (ဥပမာ pG-pG-pC-pA-pG ကို pG-pG-pCp နှင့် A-PG) ထုတ်လုပ်ရန် RNase A မှ ထွင်းထုထားသည်။RNase A သည် single-stranded RNA ကို ဖြတ်တောက်ရာတွင် အတက်ကြွဆုံးဖြစ်သည်။အကြံပြုထားသည့် အလုပ်အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 1- 100 μ G/mL ဖြစ်ပြီး၊ အမျိုးမျိုးသော တုံ့ပြန်မှုစနစ်များနှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်သည်။ဆားပါဝင်မှုနည်းသော (0-100 mM NaCl) ကို RNA-DNA ပေါင်းစပ်ဖန်တီးမှုဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားသော ကြိုးမျှင် RNA၊ နှစ်ထပ်သော RNA နှင့် RNA ကြိုးများကို ဖြတ်တောက်ရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။
သို့သော်၊ ဆားပြင်းအား မြင့်မားသော (≥0.3 M) တွင် RNase A သည် တစ်ခုတည်းသော သောင်တင်ထားသော RNA များကိုသာ ဖယ်ထုတ်သည်။
RNase A ကို plasmid DNA သို့မဟုတ် genomic DNA ၏ပြင်ဆင်မှုအတွင်း RNA ကိုဖယ်ရှားရန်အသုံးအများဆုံးဖြစ်သည်။ပြင်ဆင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း DNase သည် တက်ကြွမှုရှိမရှိ တုံ့ပြန်မှုကို အလွယ်တကူ ထိခိုက်စေနိုင်သည်။သမားရိုးကျနည်းလမ်းကို ရေချိုးခန်းထဲတွင် ပွက်ပွက်ဆူအောင် ပြုတ်ခြင်းသည် DNase လုပ်ဆောင်ချက်ကို ရပ်တန့်စေရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ဤထုတ်ကုန်တွင် DNase နှင့် ပရိုတင်းဓာတ်မပါဝင်ပါ၊ အသုံးမပြုမီ အပူကုသမှု မလိုအပ်ပါ။ထို့အပြင်၊ ဤထုတ်ကုန်ကို RNase protection analysis နှင့် RNA sequence ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းကဲ့သို့သော မော်လီကျူးဇီဝဗေဒစမ်းသပ်မှုများတွင်လည်း အသုံးပြုနိုင်သည်။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန်ကို -25 ℃ ~ - 15 ℃ 2 နှစ်ကြာသိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
သတ်မှတ်ချက်များ
| အသွင်အပြင် | အမှုန့် |
| အရေအတွက် | 100mg / 1g |
| ထုတ်ကုန်အမျိုးအစား | RNase A |
ညွှန်ကြားချက်များ
၎င်းသည် RNase A သိုလှောင်မှုဖြေရှင်းချက်ကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် ဘုံနည်းလမ်းများထဲမှတစ်ခုဖြစ်သည်။ပြင်ဆင်လို့လည်း ရပါတယ်။ဓာတ်ခွဲခန်းရှိ မိရိုးဖလာနည်းလမ်းများနှင့်အညီ အခြားနည်းလမ်းများဖြင့် သို့မဟုတ် ရည်ညွှန်းစာပေများ (ဥပမာ10 mM Tris-HCl၊ pH 7.5 သို့မဟုတ် Tris-NaCl ဖြေရှင်းချက်တွင် တိုက်ရိုက်ပျော်ဝင်သည်)
1. RNase A သိုလှောင်မှုဖြေရှင်းချက် 10 mg/mL ကိုပြင်ဆင်ရန် 10 mM ဆိုဒီယမ် acetate (pH 5.2) ကိုသုံးပါ။
2. 100 ℃ တွင် 15 မိနစ် အပူပေးပါ။
3. အခန်းအပူချိန်တွင် အအေးခံပါ၊ 1 M Tris-HCl (pH 7.4) ၏ 1/10 ပမာဏကို ထည့်ပါ၊ ၎င်း၏ pH ကို 7.4 သို့ ချိန်ညှိပါ။ဥပမာ၊ 500 mL 10 mg/mL RNase သိုလှောင်မှုဖြေရှင်းချက် 1 M Tris-HCl၊ pH7.4) ကိုထည့်ပါ။
4. အေးခဲထားသောသိုလှောင်မှုအတွက် -20 ဒီဂရီတွင်ထုပ်ပိုးထားသောခွဲထုပ်သည် 2 နှစ်အထိတည်ငြိမ်နိုင်သည်။
[မှတ်ချက်များ]-
ကြားနေအခြေအနေများအောက်တွင် RNaseA ဖြေရှင်းချက် ပြုတ်သောအခါ၊ RNase မိုးရေသည် ဖြစ်ပေါ်လာလိမ့်မည်။၎င်းကို pH နိမ့်သောနေရာတွင် ပြုတ်ပြီး မိုးရွာပါက ပရိုတင်းဓာတ် အညစ်အကြေးများ ပါဝင်ခြင်းကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်ကို သတိပြုနိုင်ပါသည်။ပွက်ပွက်ဆူပြီးနောက် အနည်တွေ့ပါက၊ အညစ်အကြေးများကို မြန်နှုန်းမြင့် centrifugation (13000rpm) ဖြင့် ဖယ်ရှားနိုင်ပြီး အအေးခံရန်အတွက် သိုလှောင်မှုအတွက် ခွဲထုပ်ပါသည်။
မှတ်စုများ
သင့်ကျန်းမာရေးနှင့် ဘေးကင်းစေရန်အတွက် လိုအပ်သော PPE၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီနှင့် လက်အိတ်များကို ဝတ်ဆင်ပါ။
