အဆင့်တစ်ဆင့် RT-qPCR SYBR Green Premix
ကြောင်နံပါတ်- HCB5140A
အဆင့်တစ်ဆင့် RT-qPCR Syber Green Premix သည် SYBR Green I dye ကိုအခြေခံ၍ fluorescence quantification အတွက်ဖြစ်သည်။gene-specific primer များကိုအသုံးပြုခြင်း၊ reverse transcription နှင့် qPCR တုံ့ပြန်မှုများကို ပြွန်တစ်ခုတည်းတွင် ပြီးမြောက်စေပြီး၊ ထပ်ခါတလဲလဲ အဖုံးဖွင့်ခြင်းနှင့် pipetting operations များပြုလုပ်ရန် လိုအပ်ကြောင်း၊ ဆန်းစစ်မှုထိရောက်မှုနှင့် ညစ်ညမ်းမှုအန္တရာယ်ကို လျှော့ချပေးသည်။RNA နမူနာများအတွက်၊ စက်ကိရိယာသည် ထိရောက်သော cDNA ပေါင်းစပ်မှုအတွက် အပူခံနိုင်ရည်ရှိသော Reverse Transcriptase နှင့် ပမာဏချဲ့ထွင်ရန်အတွက် HotStart Taq DNA Polymerase ကို အသုံးပြုထားသည်။ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသော ကြားခံစနစ်အောက်တွင်၊ အစုံလိုက်၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်းသည် အလွန်ဖော်ပြသောပစ်မှတ်များအတွက် 0.1 pg နှင့် အလယ်အလတ်ဖော်ပြသောပစ်မှတ်များအတွက် 1 pg အထိ မြင့်မားနိုင်သည်။အစုံလိုက်သည် DNA နမူနာများ ချဲ့ထွင်ခြင်းနှင့် ပမာဏအတွက် သင့်လျော်သည်။၎င်းသည် မတူညီသောအပင်နှင့် တိရစ္ဆာန်နမူနာများ၊ ဆဲလ်များနှင့် အဏုဇီဝသက်ရှိများမှ nucleic acids များ၏ အာရုံခံစားသိရှိနိုင်မှုနှင့် ပမာဏကို ပံ့ပိုးပေးသည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
| No | နာမည် | အတွဲ | အတွဲ |
| 1 | အဆင့်မြင့် Buffer | 250 μL | 2×1.25 mL |
| 2 | Advanced Enzyme Mix | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase အခမဲ့ H2O | 250 μL | 2×1.25 mL |
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ဤထုတ်ကုန်ကို အလင်းရောင်မှ -25 ~ -15 ℃ တွင် ၁ နှစ်ကြာ သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
ညွှန်ကြားချက်များ
1.Reaction စနစ်ဖွဲ့စည်းမှုd
| အစိတ်အပိုင်းများ | ထုထည် (μL) | ထုထည် (μL) | နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှု |
| အဆင့်မြင့် Buffer | ၁၂.၅ | 25 | 1× |
| Advanced Enzyme Mix | 1 | 2 | - |
| ရှေ့သို့ Primer (10 μmol/L)a | ၀.၅ | 1 | 0.2 μmol/L |
| ပြောင်းပြန် primer (10 μmol/L)a | ၀.၅ | 1 | 0.2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase အခမဲ့ H2အိုc | 25 သို့ | 50 သို့ | - |
မှတ်စုများ-
1) a.T၎င်း၏နောက်ဆုံး primer အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 0.2 μmol/L ဖြစ်ပြီး၊ ၎င်းသည် 0.1 နှင့် 1μmol/L ကြားကိုလည်း သင့်လျော်သလို ချိန်ညှိနိုင်သည်။
၂) ခ။1pg-1μg အကွာအဝေးတွင်ရှိသော Total RNA သည် အလွန်အထိခိုက်မခံသော ဓာတ်ပစ္စည်းများဖြစ်ပြီး၊ လူသားနမူနာများကို စမ်းသပ်ရာတွင် အကောင်းဆုံးထည့်သွင်းမှုမှာ 1 pg-100 ng ကိုပြသခဲ့ပြီး 15-30 အကွာအဝေးရှိ အလုံးစုံ Ct တန်ဖိုးကို သင့်လျော်သလို ထိန်းချုပ်ထားသည်။
၃) ဂ။ပစ်မှတ် ဗီဇချဲ့ထွင်မှု၏ တရားဝင်မှုနှင့် မျိုးပွားနိုင်မှုကို သေချာစေရန် 20μL သို့မဟုတ် 50μL ကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။
4)ဃ။ကျေးဇူးပြု၍ အလွန်သန့်ရှင်းသော ခုံတန်းလျားတွင် ပြင်ဆင်ပြီး နျူကလီးယား အကြွင်းအကျန်မရှိသော အကြံပြုချက်များနှင့် တုံ့ပြန်မှုပြွန်များကို အသုံးပြုပါ။filter cartridges ပါသော အကြံပြုချက်များကို အကြံပြုထားပါသည်။ဖြတ်ကျော်ညစ်ညမ်းမှုနှင့် aerosol ညစ်ညမ်းမှုကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။
2.တုံ့ပြန်မှုအစီအစဉ်
| သံသရာခြေလှမ်း | အပူချိန် | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
| စာသားပြောင်းပြန် | 50 ℃a | ၆ မိနစ် | 1 |
| ကနဦး အသွင်အပြင် | 95 ℃ | ၅ မိနစ် | 1 |
| ချဲ့ထွင်တုံ့ပြန်မှု | 95 ℃ | 15 စက္ကန့် | 40 |
| 60 ℃b | 30 စက္ကန့် | ||
| အရည်ပျော်မျဉ်းအဆင့် | တူရိယာ မူရင်းများ | 1 | |
မှတ်စုများ-
1) a.စမ်းသပ်မှုလိုအပ်ချက်အရ ပြောင်းပြန်စာသားအပူချိန်ကို 50-55°C ကြား ရွေးချယ်နိုင်ပါသည်။DNA နမူနာများအတွက်၊ ပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်ကို ချန်လှပ်ထားနိုင်ပါသည်။
၂) ခ။အထူးကိစ္စများတွင်၊ primer Tm တန်ဖိုးအရ annealing/extension temperature ကို 60°C ကို အကြံပြုထားသည်။
မှတ်စုများ
1. ဤထုတ်ကုန်သည် သုတေသနအတွက်သာဖြစ်သည်။
2. သင့်ဘေးကင်းစေရန်အတွက် ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီများနှင့် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များဖြင့် ကျေးဇူးပြု၍ လုပ်ဆောင်ပါ။
