Rnase Inhibitor (Glycerol အခမဲ့)၊
Murine RNase inhibitor သည် E.coli မှထုတ်လွှတ်သော recombinant murine RNase inhibitor ဖြစ်သည်။၎င်းသည် RNase A၊ B သို့မဟုတ် C နှင့် 1:1 အချိုးမညီသော ကာဗယ်လက်ဆက်နှောင်ခြင်းမှတဆင့် ချိတ်ဆက်ပြီး အင်ဇိုင်းသုံးမျိုး၏လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဟန့်တားကာ RNA ပျက်စီးခြင်းမှ ကာကွယ်ပေးသည်။သို့သော်၊ ၎င်းသည် RNase 1၊ RNase T1၊ S1 Nuclease၊ RNase H သို့မဟုတ် Aspergillus မှ RNase ကို ထိရောက်စွာ မနှိမ်နင်းနိုင်ပါ။Murine RNase inhibitor ကို RT-PCR၊ RT-qPCR နှင့် IVT mRNA တို့မှ စမ်းသပ်ခဲ့ပြီး၊ အမျိုးမျိုးသော စီးပွားဖြစ် Reverse transcriptases၊ DNA polymerases နှင့် RNA polymerases တို့နှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။
လူသား RNase inhibitors များနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက murine RNase inhibitor တွင် inhibitor ၏အသက်မဝင်ခြင်းကိုဖြစ်စေသည့် ဓာတ်တိုးမှုကို လွန်စွာထိခိုက်လွယ်သော cysteine နှစ်ခုမပါဝင်ပါ။၎င်းသည် DTT ၏ပါဝင်မှုနည်းသော (1 mM) ထက် တည်ငြိမ်စေသည်။ဤအင်္ဂါရပ်သည် DTT ၏ ပြင်းအား မြင့်မားသော တုံ့ပြန်မှု (ဥပမာ- အချိန်နှင့်တပြေးညီ RT-PCR) တွင် အသုံးပြုရန် သင့်လျော်စေသည်။
Aလျှောက်လွှာ
RNA ပြိုကွဲခြင်းကို ရှောင်ရှားရန် RNase နှောင့်ယှက်မှုကို ရှောင်ရှားရန် ဖြစ်နိုင်သည့် မည်သည့်စမ်းသပ်မှုတွင်မဆို ဤထုတ်ကုန်ကို တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။
1.First-strand cDNA ပေါင်းစပ်မှု၊ RT-PCR၊ RT-qPCR စသည်ဖြင့်။
2. RNA ကို in-vitro မှ ကူးယူဖော်ပြခြင်း/ဘာသာပြန်ခြင်းတွင် ပြိုကွဲခြင်းမှ ကာကွယ်ပါ (ဥပမာ- vitro in viral replication);
3. RNA အထီးကျန်မှုနှင့် သန့်စင်မှုအတွင်း RNase လုပ်ဆောင်ချက်ကို တားမြစ်ခြင်း။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
-25～-15℃ တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
အေးခဲသော-သုတ်သံသရာ ≤ 5 ကြိမ်;
သက်တမ်း ၁ နှစ်။
ယူနစ် အဓိပ္ပါယ်
ယူနစ်တစ်ခုအား RNase A ၏ 50% လှုပ်ရှားမှုကို ဟန့်တားရန် လိုအပ်သော RNase Inhibitor ပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်သည်။
မော်လီကျူးအလေးချိန်
RNase Inhibitor (Glycerol-free) သည် 50 kDa ပရိုတင်းဖြစ်သည်။
အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု
Exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်-
1 μg λ-Hind III ပါရှိသော အင်ဇိုင်း 40 U ကို ပေါက်ဖွားခြင်းသည် DNA ကို 37°C တွင် 16 နာရီကြာ ချေဖျက်နိုင်သောကြောင့် gel electrophoresis မှ သတ်မှတ်သည့်အတိုင်း DNA ၏ ခွဲခြားသိမြင်နိုင်မှု မရှိခဲ့ပါ။
Endonuclease လုပ်ဆောင်ချက်
37°C တွင် 16 နာရီကြာ DNA 1 μg λ DNA ပါရှိသော အင်ဇိုင်း 40 U ကို ပေါက်ဖွားခြင်းသည် gel electrophoresis မှ ဆုံးဖြတ်ထားသည့်အတိုင်း DNA ၏ ခွဲခြားသိမြင်နိုင်သော ဆုတ်ယုတ်ခြင်း မရှိခဲ့ပါ။
Nicking လုပ်ဆောင်ချက်-
37 ℃ တွင် 16 နာရီကြာ 1 μg pBR322 ပါသော အင်ဇိုင်း 40 U ကို ပေါက်ဖွားခြင်းသည် gel electrophoresis မှသတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်း DNA ၏ပျက်စီးခြင်းကို မတွေ့နိုင်ပေ။
RNase လုပ်ဆောင်ချက်:
37 ℃ တွင် 4 နာရီကြာ 1.6 μg MS2 RNA ပါသော အင်ဇိုင်း 40 U ကို ပေါက်ဖွားခြင်းသည် gel electrophoresis မှ သတ်မှတ်ချက်အရ RNA ၏ ခွဲခြားသိမြင်နိုင်သော ဆုတ်ယုတ်ခြင်း မရှိခဲ့ပါ။
E.coli DNA
40 U of Enzyme ကို TaqMan qPCR မှ ရှာဖွေတွေ့ရှိသည်။E.coli DNA သည် ≤ 0. 1pg/40U ဖြစ်သည်။
Notes
1.အင်ဇိုင်းမလှုပ်ရှားခြင်းကို တားဆီးရန် လှုပ်ယမ်းခြင်း သို့မဟုတ် ပြင်းထန်စွာ လှုပ်ယမ်းခြင်း မပြုပါနှင့်။
2.RNase inhibitor သည် 25 ℃ မှ 55 ℃ မှ 55 ℃ အထိ အပူချိန်တွင် တက်ကြွပြီး ≥ 65 ℃ တွင် မလှုပ်ရှားပါ။
3.RNase H၊ RNase 1 နှင့် RNase T1 တို့၏ လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဟန့်တားခြင်းမရှိပါ။
4. RNase လုပ်ဆောင်မှုကို ဟန့်တားရန်အတွက် pH အတိုင်းအတာသည် ကျယ်ပြန့်သည် (pH 5-9 တွင် တက်ကြွစွာ လှုပ်ရှားနေသည်)၊ pH 7-8 တွင် အမြင့်ဆုံးလုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြသသည်။
