BspQI
BspQI ကို သီးခြားဆိုက်များကို မှတ်မိနိုင်ပြီး အောက်တွင် ထုတ်လုပ်ထားသည့် E. coli တွင် ပြန်လည်ပေါင်းစပ်ဖော်ပြနိုင်သည်။
BspQI၊ IIs ကန့်သတ် endonuclease ကန့်သတ် endonuclease၊ သည် Bacillus sphaericus မှ ပုံတူပွားပြီး ပြင်ဆင်ထားသော BspQI gen ကိုသယ်ဆောင်သည့် ပြန်လည်ပေါင်းစပ် E. coli မျိုးကွဲမှ ဆင်းသက်လာသည်။၎င်းသည် သီးခြားဆိုက်များကို မှတ်မိနိုင်ပြီး အသိအမှတ်ပြုမှု အစီအစဥ်နှင့် ခွဲထွက်သည့်နေရာများသည် အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်-
5' · · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
ထုတ်ကုန်အင်္ဂါရပ်များ
1. မြင့်မားသောလှုပ်ရှားမှု၊ အစာခြေမြန်ခြင်း၊
2. "ဦးရေပြား" ကဲ့သို့ တိကျသောဖြတ်တောက်မှုသေချာစေရန် ကြယ်ပွင့်နည်းပါးသော လုပ်ဆောင်ချက်၊
3. BSA နှင့် တိရိစ္ဆာန်-ဇာစ်မြစ် အခမဲ့ မရှိဘဲ၊
Methylation အာရုံခံနိုင်စွမ်း
Dငါ methylationထိလွယ်ရှလွယ်မဟုတ်၊
Dစင်တီမီတာ methylationထိလွယ်ရှလွယ်မဟုတ်၊
CpG Methylationထိလွယ်ရှလွယ်မဟုတ်၊
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန် ≤ 0 ℃ တင်ပို့သင့်သည်။-25 ~ 15 ℃ အခြေအနေတွင် သိမ်းဆည်းပါ။
သိုလှောင်မှုကြားခံ
20mM Tris-HCl၊ 0.1mM EDTA၊ 500 mM KCl၊ 1.0 mM dithiothreitol၊ 500 µg/ml Recombinant Albumin၊ 0. 1% Trition X-100 နှင့် 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C)။
ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်
တစ်ယူနစ်ကို 50 µL စုစုပေါင်းတုံ့ပြန်မှုပမာဏ 50 µL တွင် 50°C တွင် 1 နာရီအတွင်း Internal control DNA ၏ 1µg ကို ချေဖျက်ရန် လိုအပ်သော အင်ဇိုင်းပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်သည်။
အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု
ပရိုတင်း သန့်စင်မှု စစ်ဆေးမှု (SDS-PAGE)-BspQI ၏သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုကို SDS-PAGE ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုမှ ≥95% ဆုံးဖြတ်သည်။
RNase-1.6μg MS2 RNA ပါရှိသော BspQI ၏ 10U သည် 50 ℃ တွင် 4 နာရီကြာ agarose gel electrophoresis မှသတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်းပြိုကွဲခြင်းမရှိပါ။
အတိအကျမဟုတ်သော DNase လုပ်ဆောင်ချက်-10U of BspQI သည် 1μg λ DNA ဖြင့် 16 နာရီကြာ 50 ℃ ၊ 1 နာရီအတွက် 50 ℃ နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက agarose gel electrophoresis မှသတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်း အပို DNA မထွက်ပါ။
ချိတ်ဆက်ခြင်းနှင့် ဖြတ်တောက်ခြင်း-10U BspQI ဖြင့် 1 μg λDNA ကို ချေဖျက်ပြီးနောက်၊ DNA အပိုင်းအစများကို 16ºC တွင် T4 DNA ligase ဖြင့် ချိတ်ဆက်နိုင်သည်။နှင့်ဤချည်နှောင်ထားသောအပိုင်းအစများကို BspQI ဖြင့်ပြန်လည်ဖြတ်နိုင်သည်။
E. coli DNA- E. coli 16s rDNA-specific TaqMan qPCR ထောက်လှမ်းမှုတွင် E.coli ဂျီနိုအကြွင်း ≤ 0.1pg/ul ရှိကြောင်းပြသခဲ့သည်။
အိမ်ရှင်ပရိုတင်းဓာတ်ကြွင်း-≤ 50 ppm
ဘက်တီးရီးယား Endotoxin- LAL-test၊ Chinese Pharmacopoeia IV 2020 ထုတ်ဝေမှုအရ၊ ဂျယ်ကန့်သတ်စမ်းသပ်နည်းလမ်း၊ အထွေထွေစည်းမျဉ်း (1143) အရ။ဘက်တီးရီးယား endotoxin ပါဝင်မှုသည် ≤10 EU/mg ဖြစ်သင့်သည်။
တုံ့ပြန်မှုစနစ်နှင့် အခြေအနေများ
| အစိတ်အပိုင်း | အတွဲ |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL အထိ |
တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေ: 50 ℃, ၁~၁၆ နာရီ။
20 မိနစ်အပူပေးခြင်း: 80 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်။
အကြံပြုထားသော တုံ့ပြန်မှုစနစ်နှင့် အခြေအနေများသည် အတော်လေးကောင်းမွန်သော အင်ဇိုင်းအစာခြေခြင်းအကျိုးသက်ရောက်မှုကို ပေးစွမ်းနိုင်သည်၊ ကိုးကားရန်အတွက်သာဖြစ်ပြီး၊ အသေးစိတ်အတွက် စမ်းသပ်မှုရလဒ်များကို ဖတ်ရှုပါ။
ထုတ်ကုန်လျှောက်လွှာ
Endonuclease အစာခြေခြင်းကိုကန့်သတ်ခြင်း၊ လျင်မြန်သောကိုယ်ပွားများ။
မှတ်စုများ
1. အင်ဇိုင်းပမာဏ ≤ 1/10 တုံ့ပြန်မှုပမာဏ။
2. glycerol အာရုံစူးစိုက်မှု 5% ထက်ပိုသောအခါတွင် ကြယ်ပွင့်လှုပ်ရှားမှု ဖြစ်ပေါ်နိုင်သည်။
3. အကြံပြုထားသော အချိုးအစားအောက်ရှိ ဆပ်ပြာမှုန့်များသည် ကွဲထွက်သည့် လုပ်ဆောင်ချက် ဖြစ်ပေါ်နိုင်သည်။
