UDG/UNG အင်ဇိုင်းများ
UDG (uracil DNA glycosylase) သည် ssDNA နှင့် dsDNA ရှိ သကြား-ဖော့စဖိတ်ကျောရိုးကြားရှိ N-glycosidic လင့်ခ်၏ ဟိုက်ဒရိုဂျင်ကို ဓါတ်ပြုပေးနိုင်သည်။၎င်းသည် လေထုညစ်ညမ်းမှုကို အလွယ်တကူ ထိန်းချုပ်နိုင်ပြီး PCR၊ qPCR၊ RT-qPCR နှင့် LAMP ကဲ့သို့သော ဘုံမော်လီကျူးဇီဝဗေဒစနစ်များအတွက် သင့်လျော်သည်။
သတ်မှတ်ချက်များ
| Expression Host | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase မျိုးဗီဇ |
| မော်လီကျူးအလေးချိန် | 24. 8kDa |
| သန့်ရှင်းစင်ကြယ်ခြင်း။ | ≥95% (SDS-PAGE) |
| အပူမလှုပ်ရှားခြင်း။ | 95 ℃၊ 5 ~ 10 မိနစ် |
| ယူနစ်အဓိပ္ပါယ် | တစ်ယူနစ် (U) ကို 25 ℃ တွင် မိနစ် 30 အတွင်း l μg dU ပါရှိသော dsDNA ၏ hydrolysis ကို ဓာတ်ကူပြုရန်အတွက် လိုအပ်သော အင်ဇိုင်းပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်သည်။ |
သိုလှောင်မှု
ထုတ်ကုန်ကို -25 ℃ ~ - 15 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်နှစ်နှစ်ကြာသိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
ညွှန်ကြားချက်များ
1.အောက်ပါစနစ်အတိုင်း PCR တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောကိုပြင်ဆင်ခြင်း။
| အစိတ်အပိုင်းများ | ထုထည် (μL) | နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှု |
| 10×PCR ကြားခံ (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/Leach |
| နမူနာပုံစံ DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. ၅ | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | ၅၀ အထိ | - |
မှတ်ချက် - စမ်းသပ်မှုလိုအပ်ချက်များအရ dUTP ၏နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုကို 0.2-0.6 mmol/L နှင့် 0.2 mmol/L dTTP အကြား ချိန်ညှိနိုင်သည်။
2.ချဲ့ထွင်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်
| သံသရာခြေလှမ်း | အပူချိန် | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
| dU ပါရှိသော ပုံစံပလိတ် ပြိုကွဲခြင်း | 25 ℃ | ၁၀ မိနစ် | 1 |
| UDG အသက်သွင်းခြင်း၊ နမူနာပုံစံ အစပျိုးခြင်း | 95 ℃ | 5~10 မိနစ် | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10 စက္ကန့် |
၃၀-၃၅ |
| ဖြာထွက်ခြင်း။ | 60 ℃ | 20 စက္ကန့် | |
| တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | 30sec/kb | |
| နောက်ဆုံးသက်တမ်းတိုး | 72 ℃ | ၅ မိနစ် | 1 |
မှတ်ချက် - 25°C တွင် တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကို စမ်းသပ်မှုလိုအပ်ချက်အရ 5-10 မိနစ်အတွင်း ချိန်ညှိနိုင်သည်။
မှတ်စုများ
1.UDG သည် PCR တုံ့ပြန်မှုကြားခံများအများစုတွင် တက်ကြွသည်။
2.အင်ဇိုင်းများကို ရေခဲသေတ္တာ သို့မဟုတ် ရေခဲရေချိုးခန်းတွင် သိမ်းဆည်းထားသင့်ပြီး အသုံးပြုပြီးပြီးချင်း - 20°C တွင် သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
3.သင့်ကျန်းမာရေးနှင့် ဘေးကင်းစေရန်အတွက် လိုအပ်သော PPE၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီနှင့် လက်အိတ်များကို ဝတ်ဆင်ပါ။
