Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) သည် 13.7 kDa ခန့်ရှိသော မော်လီကျူးအလေးချိန် 13.7 kDa ခန့်ရှိသော disulfide နှောင်ကြိုး 4 ခုပါရှိသော သောင်တင်ထားသော ပိုလီပိုက်တစ်တစ်မျိုးဖြစ်သည်။RNase A သည် အထူးသဖြင့် သောင်တင်ထားသော RNA များကို C နှင့် U အကြွင်းအကျန်များတွင် အထူးသဖြင့် ပြိုကွဲစေသည့် endoribonuclease တစ်ခုဖြစ်သည်။အတိအကျအားဖြင့်၊ ခွဲထုတ်မှုသည် နျူကလိယotide ၏ 5′-ribose နှင့် ကပ်လျက် pyrimidine nucleotide ၏ 3′-ribose ပေါ်ရှိ phosphodiester နှောင်ကြိုးကို အသိအမှတ်ပြုသည်၊ ထို့ကြောင့် 2, 3′--Cyclic phosphates 3 နှင့် သက်ဆိုင်သော hydrolyzed ′နျူကလီယိုဆိုက် ဖော့စဖိတ်များ (ဥပမာ pG-pG-pC-pA-pG ကို pG-pG-pCp နှင့် A-PG) ထုတ်လုပ်ရန် RNase A မှ ထွင်းထုထားသည်။RNase A သည် single-stranded RNA ကို ဖြတ်တောက်ရာတွင် အတက်ကြွဆုံးဖြစ်သည်။အကြံပြုထားသော အလုပ်အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 1-100μG/mL ဖြစ်ပြီး၊ အမျိုးမျိုးသော တုံ့ပြန်မှုစနစ်များနှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်သည်။ဆားပါဝင်မှုနည်းသော (0-100 mM NaCl) ကို RNA-DNA ပေါင်းစပ်ဖန်တီးမှုဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားသော ကြိုးမျှင် RNA၊ နှစ်ထပ်သော RNA နှင့် RNA ကြိုးများကို ဖြတ်တောက်ရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။သို့သော်လည်း ဆားပြင်းအား မြင့်မားသော (≥0.3 M) တွင် RNase A သည် သီးသန့်သောင်တင်ထားသော RNA ကိုသာ ခွာသည်။
RNase A သည် plasmid DNA သို့မဟုတ် genomic DNA ပြင်ဆင်မှုအတွင်း RNA ကို ဖယ်ရှားရန် အသုံးများဆုံးဖြစ်သည်။ ပြင်ဆင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း DNase တက်ကြွသည်ဖြစ်စေ တုံ့ပြန်မှုကို အလွယ်တကူ ထိခိုက်စေနိုင်သည်။သမားရိုးကျနည်းလမ်းကို ရေချိုးခန်းထဲတွင် ပွက်ပွက်ဆူအောင် ပြုတ်ခြင်းသည် DNase လုပ်ဆောင်ချက်ကို ရပ်တန့်စေရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ဤထုတ်ကုန်တွင် DNase နှင့် ပရိုတင်းဓာတ်မပါဝင်ပါ၊ အသုံးမပြုမီ အပူကုသမှု မလိုအပ်ပါ။ထို့အပြင်၊ ဤထုတ်ကုန်ကို RNase protection analysis နှင့် RNA sequence ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းကဲ့သို့သော မော်လီကျူးဇီဝဗေဒစမ်းသပ်မှုများတွင်လည်း အသုံးပြုနိုင်သည်။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန်ကို -25 ~ 15 ℃တွင်သိမ်းဆည်းနိုင်ပြီး 2 နှစ်သက်တမ်းရှိသည်။
ညွှန်ကြားချက်များ
၎င်းသည် RNase A သိုလှောင်မှုဖြေရှင်းချက်ကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် ဘုံနည်းလမ်းများထဲမှတစ်ခုဖြစ်သည်။ဖြင့်လည်း ပြင်ဆင်နိုင်သည်။ဓာတ်ခွဲခန်းရှိ သမားရိုးကျနည်းလမ်းများ သို့မဟုတ် အကိုးအကားစာပေ (ဥပမာ10 mM Tris-HCl၊ pH 7.5 သို့မဟုတ် Tris-NaCl ဖြေရှင်းချက်တွင် တိုက်ရိုက်ပျော်ဝင်သည်)
1. RNase A သိုလှောင်မှုဖြေရှင်းချက် 10 mg/mL ကိုပြင်ဆင်ရန် 10 mM ဆိုဒီယမ် acetate (pH 5.2) ကိုအသုံးပြုပါ။
2. 100 ℃ တွင် 15 မိနစ် အပူပေးပါ။
3. အခန်းအပူချိန်တွင် အအေးခံပါ၊ 1 M Tris-HCl (pH 7.4) ၏ 1/10 ပမာဏကို ထည့်ပါ၊ ၎င်း၏ pH ကို 7.4 သို့ ချိန်ညှိပါ။ဥပမာ၊ 500 ml 10g/ml RNase သိုလှောင်မှုဖြေရှင်းချက် 1M Tris-HCL၊ PH7.4 ထည့်ပါ)
4. 2 နှစ်အထိတည်ငြိမ်နိုင်သောအေးခဲထားသောသိုလှောင်မှုအတွက် -20 ဒီဂရီတွင်ထုပ်ပိုးထားသောခွဲထုပ်။
[မှတ်ချက်များ]- ကြားနေအခြေအနေများအောက်တွင် RNaseA ဖြေရှင်းချက် ဆူလာသောအခါ၊ RNase မိုးရွာသွန်းမှု ဖြစ်ပေါ်လိမ့်မည်။၎င်းကို pH နိမ့်သောနေရာတွင် ပြုတ်ပြီး မိုးရွာပါက ပရိုတင်းဓာတ် အညစ်အကြေးများ ပါဝင်ခြင်းကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်ကို သတိပြုနိုင်ပါသည်။ပွက်ပွက်ဆူပြီးနောက် အညစ်အကြေးများကို တွေ့ရှိပါက အညစ်အကြေးများကို မြန်နှုန်းမြင့် centrifugation (13000rpm) ဖြင့် ဖယ်ရှားနိုင်ပြီး အအေးခံရန်အတွက် သိုလှောင်မှုအတွက် ခွဲထုပ်ပါသည်။
ကုန်ပစ္စည်းသတင်းအချက်အလက်
| Synonyms | Ribonuclease I;ပန်ကရိယ ribonuclease;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS နံပါတ် | ၉၀၀၁-၉၉-၄ |
| အသွင်အပြင် | အဖြူရောင် lyophilized အမှုန့် |
| မော်လီကျူးအလေးချိန် | ~ 13.7kDa (အမိုင်နိုအက်ဆစ်အစီအစဉ်) |
| Ph တန်ဖိုး | 7.6 (လုပ်ဆောင်ချက် အပိုင်းအခြား 6-10) |
| သင့်လျော်သောအပူချိန် | 60 ℃ (လုပ်ဆောင်ချက်အကွာအဝေး 15-70 ℃) |
| အသက်ဝင်နေသော အေးဂျင့် | Na2+.K+ |
| တားမြစ်သည်။ | Rnase Inhibitor |
| Inactivation နည်းလမ်း | အပူပေးခြင်းဖြင့် အသက်မသွင်းနိုင်ပါ၊ centrifuge ကော်လံကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။ |
| မူလ | ဗိုင်းဗိုင်း |
| ပျော်ဝင်မှု | ရေတွင်ပျော်ဝင်နိုင်သည် (10mg/ml) |
| အခြောက်တွင် ဆုံးရှုံးမှု | ≤5.0% |
| အင်ဇိုင်းလှုပ်ရှားမှု | ≥60 Knitz ယူနစ်/မီလီဂရမ် |
| Isoelectric အမှတ် | ၉.၆ |
မှတ်စုများ
သင့်ဘေးကင်းရေးနှင့် ကျန်းမာရေးအတွက် ကျေးဇူးပြု၍ ခွဲစိတ်ခန်းသုံး အင်္ကျီများနှင့် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များ ဝတ်ဆင်ပါ။
