Multiplex qPCR Probe Premix
ကြောင်နံပါတ်- HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) သည် 2× real-time quantitative PCR amplification အတွက် အကြိုဖြေရှင်းချက်တစ်ခုဖြစ်ပြီး အရောင်ရှိ အပြာရောင်ဖြစ်ပြီး နမူနာထပ်တိုးမှု၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသည်။ဤထုတ်ကုန်သည် တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုတွင် ကောင်းမွန်စွာ တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုတွင် fluorescent quantitative PCR တုံ့ပြန်မှုလေးခုအထိ ပေးနိုင်သော 2× Mix ကြိုတင်ရောစပ်ထားသော ဓာတ်ပစ္စည်းများဖြစ်သည်။ဤထုတ်ကုန်တွင် hot-start Taq အင်ဇိုင်းအတွက် မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသော ပဋိပစ္စည်းနည်းလမ်း ပါ၀င်သည်၊၊ ချဲ့ထွင်မှု အာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် တိကျမှုကို များစွာတိုးတက်စေပါသည်။တစ်ချိန်တည်းမှာပင်၊ ဤထုတ်ကုန်သည် တုံ့ပြန်မှု၏ ချဲ့ထွင်မှုစွမ်းဆောင်ရည်ကို တိုးတက်စေပြီး အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းသော ပုံစံပလိတ်များ၏ ထိရောက်သော ချဲ့ထွင်မှုကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်သည့် ဘက်စုံတုံ့ပြန်မှုကြားခံကို နက်ရှိုင်းစွာ ပိုမိုကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်ထားသည်။ဤထုတ်ကုန်ကို genotyping နှင့် multiplex quantitative analysis အတွက် သုံးနိုင်သည်။
သတ်မှတ်ချက်
| ဟော့စတင် | Built-in hot start |
| ထောက်လှမ်းနည်း | Primer-probe ထောက်လှမ်းခြင်း။ |
| PCR နည်းလမ်း | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| နမူနာအမျိုးအစား | DNA |
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန်ကို ရေခဲခြောက်ဖြင့် ပို့ဆောင်ထားပြီး -25 ~ 15 ℃ တွင် 2 နှစ်ကြာ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။
ညွှန်ကြားချက်များ
1. တုံ့ပြန်မှုစနစ်
| အစိတ်အပိုင်းများ | ထုထည် (μL) | နောက်ဆုံး အာရုံစူးစိုက်မှု |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | ၁၂.၅ | 1× |
| Primer ရောနှော (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| Probe ရောနှော (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox ရည်ညွှန်းဆိုးဆေး | ၀.၅ | 1× |
| နမူနာပုံစံ DNA/cDNA | ၁-၁၀ | - |
| ddH2O | 25 အထိ | - |
မှတ်စုများ-ပြင်းထန်စွာလှုပ်ရမ်းခြင်းမှရှောင်ရှားရန်အသုံးမပြုမီသေချာစွာရောမွှေပါ။
aPrimer အာရုံစူးစိုက်မှု- Primer Mix တွင် primer အတွဲများစွာပါရှိသည်၊ များသောအားဖြင့် primer တစ်ခုစီသည် နောက်ဆုံးပြင်းအား 0.2 μmol/L တွင်ရှိပြီး 0.1 နှင့် 0.5 μmol/L ကြားကိုလည်း သင့်လျော်သလို ချိန်ညှိနိုင်သည်။
ခProbe အာရုံစူးစိုက်မှု- Probe Mix တွင် မတူညီသော fluorescence signals များပါရှိသော probes အများအပြားပါဝင်ပြီး probe တစ်ခုစီ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် သီးခြားအခြေအနေအရ 50 နှင့် 250 nmol/L အကြား ချိန်ညှိနိုင်သည်။
၁။Rox ဆိုးဆေးရည်ညွှန်း-ရေတွင်းများကြားမှထုတ်ပေးသော fluorescence အချက်ပြမှုအမှားကိုပြင်ရန် Applied Biosystems ကဲ့သို့သော Real Time PCR ချဲ့ထွင်သည့်ကိရိယာတွင်အသုံးပြုသည်။ဤထုတ်ကုန်တွင် Rox ဆိုးဆေးရည်ညွှန်းမပါဝင်ပါ။လိုအပ်ပါက Cas#10200 ကိုအကြံပြုပါသည်။
၂။နမူနာပုံစံကို ပျော့ပြောင်းခြင်း- qPCR သည် အလွန်ထိခိုက်လွယ်ပြီး အသုံးပြုရန်အတွက် ပုံစံပလိတ်ကို မှေးမှိန်ရန် အကြံပြုထားသည်။နမူနာပုံစံသည် cDNA စတော့ရှယ်ယာဖြေရှင်းချက်ဖြစ်ပါက၊ နမူနာပမာဏသည် စုစုပေါင်းပမာဏ၏ 1/10 ထက်မပိုသင့်ပါ။
၃။တုံ့ပြန်မှုစနစ်- 25μL၊30μL သို့မဟုတ် 50 μL သည် ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇချဲ့ထွင်မှု၏ထိရောက်မှုနှင့်ထပ်တလဲလဲဖြစ်နိုင်မှုကိုသေချာစေရန်အကြံပြုထားသည်။
၄။စနစ်ပြင်ဆင်မှု- အလွန်သန့်ရှင်းသောခုံတန်းလျားတွင် ပြင်ဆင်ပါ၊ နျူကလီးယားအကြွင်းအကျန်မရှိဘဲ အကြံပြုချက်များနှင့် တုံ့ပြန်မှုပြွန်များကို အသုံးပြုပါ။filter cartridges ပါသော အကြံပြုချက်များကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။ဖြတ်ကျော်ညစ်ညမ်းမှုနှင့် aerosol ညစ်ညမ်းမှုကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။
၂။တုံ့ပြန်မှုအစီအစဉ်
| သံသရာခြေလှမ်း | အပူချိန်. | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
| ကနဦး-အသွင်အပြင် | 95 ℃ | ၅ မိနစ် | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 15 စက္ကန့် | 45 |
| ဖျက်သိမ်းခြင်း/သက်တမ်းတိုးခြင်း။ | 60 ℃ | 30 စက္ကန့် |
မှတ်စုများ-
1.Annealing/Extension- ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော primer Tm တန်ဖိုးအရ အပူချိန်နှင့် အချိန်ကို သင့်လျော်စွာ ချိန်ညှိနိုင်ပါသည်။
၂။မီးချောင်းများ အချက်ပြရယူမှု- မတူညီသော qPCR ထောက်လှမ်းမှုတူရိယာအတွက် လိုအပ်သော မီးချောင်းအချက်ပြရယူမှုအချိန်သည် ကွဲပြားသည်၊ ကျေးဇူးပြု၍ အနည်းဆုံးအချိန်ကန့်သတ်ချက်အတိုင်း သတ်မှတ်ပါ။အသုံးများသော တူရိယာများစွာ၏ အချိန်ကို အောက်ပါအတိုင်း သတ်မှတ်သည်။
20 စက္ကန့်- အသုံးချဇီဝစနစ် 7700၊ 7900HT၊ 7500 မြန်
31 စက္ကန့်- အသုံးချဇီဝစနစ် 7300
32 စက္ကန့်- အသုံးချဇီဝစနစ် 7500
မှတ်စုများ
သင့်ကျန်းမာရေးနှင့် ဘေးကင်းစေရန်အတွက် လိုအပ်သော PPE၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီနှင့် လက်အိတ်များကို ဝတ်ဆင်ပါ။
