Mouse Genotyping Kit

ကြောင်နံပါတ်- HCR2021A

ဤထုတ်ကုန်သည် DNA အစိမ်းလိုက်ထုတ်ယူခြင်းနှင့် PCR အသံချဲ့ထွင်ခြင်းစနစ်အပါအဝင် mouse genotypes များကို လျင်မြန်စွာဖော်ထုတ်နိုင်စေရန်အတွက် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည့်ကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သည်။Lysis Buffer နှင့် Proteinase k တို့မှ ရိုးရှင်းစွာ ခွဲထုတ်ပြီးနောက် ထုတ်ကုန်ကို မောက်စ်အမြီး၊ နား၊ ခြေချောင်းနှင့် အခြားတစ်ရှူးများမှ တိုက်ရိုက် PCR ချဲ့ထွင်ရန်အတွက် အသုံးပြုနိုင်သည်။တစ်ညလုံး အစာမကြေခြင်း၊ phenol-chloroform ထုတ်ယူခြင်း သို့မဟုတ် ကော်လံသန့်စင်ခြင်း မရှိဘဲ၊ ၎င်းသည် ရိုးရှင်းပြီး စမ်းသပ်မှုများ၏ အချိန်ကို တိုစေပါသည်။ထုတ်ကုန်သည် 2kb အထိ ပစ်မှတ်အပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်ရန်နှင့် primer အတွဲ 3 တွဲအထိပါရှိသော multiplex PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် သင့်လျော်သည်။2×Mouse Tissue Direct PCR Mix တွင် မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသော DNA polymerase၊ Mg ပါရှိသည်။²⁺၊ dNTPs နှင့် မြင့်မားသော ချဲ့ထွင်မှု ထိရောက်မှု နှင့် inhibitor ခံနိုင်ရည်တို့ကို ပေးစွမ်းရန် အကောင်းဆုံးသော ကြားခံစနစ်တစ်ခု၊ ထို့ကြောင့် PCR တုံ့ပြန်မှုများကို ပုံစံပလိတ်နှင့် primers များပေါင်းထည့်ကာ 1× သို့ ရေဓာတ်ပြန်လည်ဖြည့်တင်းခြင်းဖြင့် PCR တုံ့ပြန်မှုများကို လုပ်ဆောင်နိုင်မည်ဖြစ်သည်။ဤထုတ်ကုန်နှင့်ချဲ့ထွင်ထားသော PCR ထုတ်ကုန်သည် 3′ အဆုံးတွင် ထင်ရှားသော “A” အခြေခံရှိပြီး သန့်စင်ပြီးနောက် TA ပွားခြင်းအတွက် တိုက်ရိုက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။

အစိတ်အပိုင်းများ

သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ

ထုတ်ကုန်များကို -25 ~ 15 ℃ 2 နှစ်ကြာသိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။ဖျော်ပြီးနောက် Lysis Buffer ကို 2 ~ 8 ℃ တွင် အချိန်တိုအတွင်း အများအပြား သိမ်းဆည်းနိုင်ပြီး အသုံးပြုသည့်အခါ ကောင်းမွန်စွာ ရောနှောနိုင်သည်။

လျှောက်လွှာ

ဤထုတ်ကုန်သည် မောက်စ်နောက်ကောက်ကျခြင်းကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း၊ မျိုးရိုးဗီဇရှာဖွေခြင်း၊ မျိုးရိုးလိုက်ခြင်းစသည်ဖြင့် သင့်လျော်သည်။

အင်္ဂါရပ်များ

၁။ရိုးရှင်းသောလုပ်ဆောင်ချက်- မျိုးရိုးဗီဇ DNA ကိုထုတ်ယူရန်မလိုအပ်ပါ။

၂။ကျယ်ပြန့်သောအပလီကေးရှင်း- မောက်စ်တစ်ရှူးအမျိုးမျိုးကို တိုက်ရိုက်ချဲ့ထွင်ရန်အတွက် သင့်လျော်သည်။

ညွှန်ကြားချက်များ

၁။မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ပေးခြင်း။

1) lysate ပြင်ဆင်ခြင်း။

တစ်ရှူး lysate ကို lysed ပြုလုပ်ရန် မောက်စ်နမူနာ အရေအတွက်အလိုက် ပြင်ဆင်သည် (အသုံးပြုရန်အတွက် ပမာဏအလိုက် တစ်ရှူး lysate ကို ဆိုဒ်တွင် ပြင်ဆင်ထားသင့်ပြီး အသုံးပြုရန်အတွက် နှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ် ရောစပ်ထားသည်)၊ နမူနာတစ်ခုအတွက် လိုအပ်သော ဓါတ်ကူပစ္စည်း အချိုးအစားမှာ အောက်ပါအတိုင်း ဖြစ်ပါသည်။

2) နမူနာပြင်ဆင်ခြင်းနှင့် Lysis

တစ်ရှူးအသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။

သန့်ရှင်းသော centrifuge ပြွန်များတွင် သင့်လျော်သော ကြွက်တစ်ရှူးနမူနာများကို ယူကာ လတ်ဆတ်သော တစ်ရှူး lysate 200μL ကို centrifuge tube တစ်ခုစီသို့ ထည့်ကာ vortex နှင့် shake ပြီးနောက် 55 ℃ တွင် 30 မိနစ်ကြာ ဖုတ်သွင်းကာ 98 ℃ ဖြင့် 3 မိနစ်ကြာ အပူပေးပါ။

3) Centrifugation

lysate ကိုကောင်းစွာလှုပ်ခါပြီး 12,000 rpm တွင် 5 မိနစ်ကြာ centrifuge ။Supernatant ကို PCR ချဲ့ထွင်ခြင်းအတွက် နမူနာအဖြစ် အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ပုံစံခွက်ကို သိုလှောင်ရန် လိုအပ်ပါက၊ supernatant ကို အခြား sterile centrifuge tube သို့ လွှဲပြောင်းပြီး -20 ℃ တွင် 2 ပတ်ကြာ သိမ်းဆည်းပါ။

၂။PCR ချဲ့ထွင်ခြင်း။

2×Mouse Tissue Direct PCR Mix ကို -20 ℃မှဖယ်ရှားပြီး ရေခဲပေါ်တွင် ရောမွှေပြီး အောက်ဖော်ပြပါဇယားအတိုင်း PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်ကို ပြင်ဆင်ပါ (ရေခဲပေါ်တွင်လုပ်ဆောင်ပါ)။

မှတ်ချက် -

က) ထည့်သွင်းသည့်ပမာဏသည် စနစ်၏ 1/10 ထက် မကျော်လွန်သင့်ပါ၊ နှင့် အလွန်အကျွံထည့်ပါက PCR ချဲ့ထွင်ခြင်းကို တားဆီးနိုင်သည်။

PCR အခြေအနေများကို အကြံပြုထားသည်။

မှတ်ချက် -

က) Annealing temperature- primer ၏ Tm တန်ဖိုးကို ကိုးကား၍ primer ၏ ပိုသေးသော Tm value တွင် annealing temperature ကို သတ်မှတ်ရန် အကြံပြုထားသည်။

အဖြစ်များသော ပြဿနာများနှင့် ဖြေရှင်းချက်များ

၁။ပစ်မှတ်ထားသော အကွက်များ မရှိပါ။

1) အလွန်အကျွံ lysis ထုတ်ကုန်။ပုံမှန်အားဖြင့် စနစ်၏ 1/10 ထက်မပိုသော ပုံစံခွက်၏ အသင့်လျော်ဆုံးပမာဏကို ရွေးချယ်ပါ။

2) နမူနာအရွယ်အစား အလွန်ကြီးသည်။lysate ကို 10 ကြိမ် ရောမွှေပြီး ချဲ့ရန် သို့မဟုတ် နမူနာအရွယ်အစားကို လျှော့ချပြီး ပြန်လည် lysis လုပ်ပါ။

၃) တစ်ရှူးနမူနာများသည် မလတ်ဆတ်ပါ။လတ်ဆတ်သော တစ်ရှူးနမူနာများကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။

4) Primer အရည်အသွေးညံ့ခြင်း။primer အရည်အသွေးကိုစစ်ဆေးရန်နှင့် primer ဒီဇိုင်းကိုအကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ရန် amplification အတွက် genomic DNA ကိုသုံးပါ။

၂။အတိအကျမဟုတ်သော အသံချဲ့စက်

1) annealing temperature သည် နိမ့်လွန်းပြီး cycle number သည် မြင့်မားလွန်းသည်။annealing အပူချိန်ကိုတိုးမြှင့်ပြီးသံသရာအရေအတွက်ကိုလျှော့ချ;

2) Template အာရုံစူးစိုက်မှု အလွန်မြင့်မားသည်။ပုံစံပလိတ်ပမာဏကို လျှော့ချပါ သို့မဟုတ် ချဲ့ထွင်ပြီးနောက် 10 ကြိမ် တင်းပလိတ်ကို ဖျန်းပေးပါ။

3) Primer Specification ညံ့ဖျင်းခြင်း။primer ဒီဇိုင်းကို အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်လုပ်ပါ။

မှတ်စုများ

၁။နမူနာများကြားတွင် ကူးဆက်ညစ်ညမ်းမှုကို ရှောင်ရှားနိုင်ရန်၊ နမူနာယူကိရိယာအများအပြားကို ပြင်ဆင်ထားသင့်ပြီး ကိရိယာများ၏မျက်နှာပြင်ကို 2% ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက်ဖြေရှင်းချက် သို့မဟုတ် နျူကလိစ်အက်ဆစ် သန့်စင်ဆေးဖြင့် ထပ်ခါတလဲလဲ အသုံးပြုပါက နမူနာတစ်ခုစီတိုင်းပြီးနောက် ကိရိယာများ၏မျက်နှာပြင်ကို သန့်စင်နိုင်သည်။

၂။လတ်ဆတ်သော မောက်စ်တစ်ရှူးများကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားပြီး၊ ချဲ့ထွင်မှုရလဒ်များကို မထိခိုက်စေရန် နမူနာထုထည်ပမာဏသည် အလွန်မကြီးသင့်ပါ။

၃။Lysis Buffer သည် မကြာခဏ အေးခဲနေသော အေးခဲခြင်းကို ရှောင်ရှားသင့်ပြီး အကြိမ်ရေတိုသုံးရန်အတွက် 2 ~ 8 ℃ တွင် သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။အပူချိန်နိမ့်သောနေရာတွင် သိမ်းဆည်းထားပါက မိုးရွာနိုင်ပြီး အသုံးမပြုမီ အပြည့်အဝ ပျော်ဝင်ရပါမည်။

၄။PCR Mix သည် မကြာခဏ အေးခဲနေသော အေးခဲခြင်းကို ရှောင်ရှားသင့်ပြီး 4 ℃ တွင် ခဏတာ ထပ်ခါထပ်ခါ အသုံးပြုရန်အတွက် သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။

၅။ဤထုတ်ကုန်သည် သိပ္ပံနည်းကျ စမ်းသပ်သုတေသနအတွက်သာဖြစ်ပြီး ဆေးခန်းရောဂါရှာဖွေခြင်း သို့မဟုတ် ကုသခြင်းတွင် အသုံးမပြုသင့်ပါ။