Bst 2.0 DNA Polymerase (Glycerol အခမဲ့)
Bst DNA polymerase V2 ကို Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I မှ ဆင်းသက်လာပြီး 5′→3′ DNA polymerase လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် အားကောင်းသော ကွင်းဆက်အစားထိုး လုပ်ဆောင်ချက် ပါရှိသော်လည်း 5′→3′ exonuclease လုပ်ဆောင်ချက် မရှိပါ။Bst DNA Polymerase V2 သည် ကြိုးမျှင်နေရာပြောင်းခြင်း၊ isothermal amplification LAMP (Loop mediated isothermal amplification) နှင့် လျင်မြန်သော sequencing အတွက် အကောင်းဆုံးသင့်လျော်သည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
| အစိတ်အပိုင်း | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(Glycerol-free)(8U/μL) | 0.2 မီလီမီတာ | 1 mL | 10 mL |
| 10×HC Bst V2 ကြားခံ | 1.5 မီလီမီတာ | 2 × 1.5 မီလီမီတာ | 3×10 ml |
| MgSO၄(100 မီလီမီတာ) | 1.5 မီလီမီတာ | 2 × 1.5 မီလီမီတာ | 2×10 ml |
လျှောက်လွှာများ
1.LAMP isothermal amplification
2.DNA ကြိုးမျှင်သည် single displacement တုံ့ပြန်မှု
3.High GC gene sequencing
4.DNA ၏ နာနိုဂရမ်အဆင့်ကို စီစစ်ခြင်း။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေ
သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးသည် 0°C အောက်တွင်ရှိပြီး -25°C~-15°C တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်
တစ်ယူနစ်ကို 65°C တွင် မိနစ် 30 အတွင်း အက်ဆစ်မပျော်ဝင်နိုင်သော ပစ္စည်းအဖြစ် 25 nmol ၏ dNTP ပေါင်းစပ်သည့် အင်ဇိုင်းပမာဏဟု သတ်မှတ်သည်။
အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု
1.ပရိုတင်း သန့်စင်မှု စစ်ဆေးမှု (SDS-PAGE):Bst DNA polymerase V2 ၏ သန့်စင်မှုသည် ≥99% ကို Coomassie Blue ထောက်လှမ်းမှုကို အသုံးပြု၍ SDS-PAGE ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် ဆုံးဖြတ်သည်။
2.Exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်:1 μg λ -Hind Ⅲ ပါဝင်သော Bst DNA polymerase V2 ၏ အနည်းဆုံး 8 U ပါဝင်သော 50 μL တုံ့ပြန်မှုသည် DNA ကို 37 ℃ တွင် 16 နာရီကြာ ချေဖျက်ပေးခြင်းဖြင့် သတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်း ခွဲခြား၍မရပါ။
3.Nickase လုပ်ဆောင်ချက်:37°C တွင် 1 μg pBR322 DNA ပါရှိသော Bst DNA polymerase V2 ၏ အနည်းဆုံး 8 U ပါဝင်သော 50 μL တုံ့ပြန်မှုတွင် ပေါက်ဖွားခြင်းသည် 37°C တွင် 16 နာရီကြာ ရလဒ်အဖြစ် ခွဲခြား၍မရပါ။
4.RNase လုပ်ဆောင်ချက်:37°C တွင် 1.6 μg MS2 RNA ပါ၀င်သော Bst DNA polymerase V2 ၏ အနည်းဆုံး 8 U ပါဝင်သော 50 μL တုံ့ပြန်မှုတွင် ပေါက်ဖွားခြင်းသည် သတ်မှတ်ချက်အရ ခွဲခြား၍မရသော ပြိုကွဲပျက်စီးမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။
5.E. coli DNA-Bst DNA polymerase V2 ၏ 120 U ကို TaqMan qPCR ဖြင့် E. coli 16S rRNA locus အတွက် သီးသန့် primers ဖြင့် E. coli genomic DNA ပါဝင်မှုကို စစ်ဆေးသည်။E. coli genomic DNA ညစ်ညမ်းမှုသည် ≤1 မိတ္တူဖြစ်သည်။
မီးခွက်တုံ့ပြန်မှု
| အစိတ်အပိုင်းများ | ၂၅μL |
| 10×HC Bst V2 ကြားခံ | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 မီလီမီတာ) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM တစ်ခုစီ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 အစိမ်းရောင် (25×)a | 1.0 μL |
| Primer ရောမွှေပါ။b | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-မပါ) (8 U/uL) | 1 μL |
| ပုံစံခွက် | × µL |
| ddH₂O | 25 μL အထိ |
မှတ်စုများ-
1) a.SYTOTM 16 အစိမ်းရောင် (25×) : စမ်းသပ်မှုလိုအပ်ချက်အရ အခြားဆိုးဆေးများကို အစားထိုးအသုံးပြုနိုင်ပါသည်။
၂) ခ။Primer ရောနှောမှု- 20 µ M FIP၊ 20 µ M BIP၊ 2.5 µ M F3၊ 2.5 µ M B3၊ 5 µ M LF၊ 5 µ M LB နှင့် အခြား volumes များကို ရောစပ်ခြင်းဖြင့် ရရှိသည်။
တုံ့ပြန်မှုနှင့် အခြေအနေ
1 × HC Bst V2 Buffer၊ ပေါက်ဖွားသည့် အပူချိန်သည် 60°C နှင့် 65°C ကြားဖြစ်သည်။
အပူမလှုပ်ရှားခြင်း။
80°C၊ 20မိနစ်
