5 × Neoscript အမြန် RT-qPCR ပရီမီx အပေါင်း-UNG

ကြောင်နံပါတ်- HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) သည် one-tube probe-based mix နှင့် one-step reverse transcription နှင့် quantitative PCR (qRT-PCR) အတွက် သင့်လျော်သော အလွန်တည်ငြိမ်သော one-tube probe-based mix ဖြစ်သည်။၎င်းသည် primers များနှင့် probes များကိုကြိုတင်ရောစပ်ခြင်းကိုပံ့ပိုးပြီးအပူချိန်နိမ့်သောအချိန်အကြာကြီးသိုလှောင်ပြီးနောက်တည်ငြိမ်နေနိုင်သည်။စမ်းသပ်မည့်နမူနာကို ထပ်လောင်းပြွန်ဖွင့်ခြင်း/ပိုက်ဆက်ခြင်းလုပ်ဆောင်ခြင်းမရှိဘဲ အသုံးပြုသည့်အခါ တိုက်ရိုက်ထည့်နိုင်သည်။ဤထုတ်ကုန်သည် အစိတ်အပိုင်းများဖြစ်သော ဥပမာ- hot-start DNA polymerase၊ M-MLV၊ heat-labile uracil DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl₂၊ dNTPs (dUTP နှင့် dTTP အစား) နှင့် stabilizers များ။မျိုးဗီဇပြုပြင်ထားသော လျင်မြန်သောချဲ့ထွင်မှုပြောင်းပြန် transcriptase နှင့် DNA polymerase ဖြင့်၊ ၎င်းသည် မိနစ် 20 မှ 40 အတွင်း PCR ချဲ့ထွင်မှုကို အပြီးသတ်ရန် ဖြစ်နိုင်သည်။ဤဓာတ်ပြုမှုသည် qPCR အတွက် အထူးကြားခံကို အသုံးပြု၍ တားဆီးမှုဆန့်ကျင်သော ချဲ့ထွင်မှုအင်ဇိုင်းနှင့် UNG အင်ဇိုင်းတို့ ရောစပ်ထားသော အင်ဇိုင်းများကို အသုံးပြုသည်။ထို့ကြောင့်၊ ၎င်းသည် ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇများကို ကောင်းမွန်စွာချဲ့ထွင်နိုင်စေပြီး PCR အကြွင်းအကျန်နှင့် လေထုညစ်ညမ်းမှုကြောင့် ဖြစ်ရသည့် မှားယွင်းသောချဲ့ထွင်မှုကို တားဆီးနိုင်သည်။ဤဓာတ်ပစ္စည်းများသည် အသုံးချဇီဝစနစ်များ၊ Eppendorf၊ Bio-Rad နှင့် Roche ကဲ့သို့သော ထုတ်လုပ်သူများထံမှ fluorescence quantitative PCR တူရိယာအများစုနှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။

အစိတ်အပိုင်း

၁။25× Neoscript အမြန် RTase/UNG ရောနှောခြင်း။

၂။5× Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)

သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ

အစိတ်အပိုင်းအားလုံးကို -20 ℃ ဖြင့် ရေရှည်သိုလှောင်ရန်နှင့် 4 ℃ 3 လအထိ ထားရှိသင့်သည်။အသုံးမပြုမီ ရောနှောပြီး စင်ထရစ်ဖယ်ပြီး သေချာရောမွှေပါ။မကြာခဏ အေးခဲခြင်းမှ ရှောင်ကြဉ်ပါ။

qRT-PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ် ပြင်ဆင်ခြင်း။

1) a. primer ၏နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသည် အများအားဖြင့် 0.2μM ဖြစ်သည်။ပိုမိုကောင်းမွန်သောရလဒ်များအတွက်၊ primer အာရုံစူးစိုက်မှုကို 0.2-1μM အကွာအဝေးအတွင်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပြုလုပ်နိုင်သည်။ယေဘုယျအားဖြင့်၊ probe အာရုံစူးစိုက်မှုကို 0.1-0.3μM အကွာအဝေးအတွင်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပြုလုပ်နိုင်သည်။

2) b.မြန်ဆန်သော PCR လုပ်ထုံးလုပ်နည်းကို အသုံးပြုသောအခါ၊ primers နှင့် probes များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို တိုးမြှင့်ခြင်းသည် ပိုမိုကောင်းမွန်သော ချဲ့ထွင်မှုရလဒ်များကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်ပြီး ၎င်းတို့၏ အချိုးကို လျော်ညီစွာ ပိုမိုကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်သင့်သည်။

3) မတူညီသောနမူနာများတွင် မတူညီသောအမျိုးအစားများနှင့် အကြောင်းအရာများ ပါဝင်ပြီး ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇ၏ ကူးယူမှုအရေအတွက် ကွဲပြားသည်။နမူနာပမာဏကို ပကတိအခြေအနေအရ ထည့်သွင်းစဉ်းစားသင့်သည်။လိုအပ်ပါက နမူနာကို နျူကလီးယားကင်းစင်သောရေ သို့မဟုတ် TE Buffer ဖြင့် ရောချပါ။

တုံ့ပြန်မှု Cအခြေအနေများ

အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

1.လုပ်ဆောင်ချက် ထောက်လှမ်းခြင်း- qPCR ၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ တိကျမှုနှင့် ထပ်တလဲလဲနိုင်မှု။

၂။exogenous nuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိပါ- exogenous endonuclease နှင့် exonuclease ညစ်ညမ်းမှုမရှိပါ။

မှတ်စုများ

၁။လျင်မြန်သော DNA polymerase ၏ချဲ့ထွင်မှုနှုန်းသည် 1kb/10s ထက်မနည်း။မတူညီသော PCR တူရိယာများတွင် မတူညီသော အပူနှင့် အအေးခံနှုန်းများ၊ အပူချိန်ထိန်းချုပ်မှုမုဒ်များနှင့် အပူစီးကူးနိုင်မှုတို့ရှိသောကြောင့် သင့်တိကျသော မြန်ဆန်သော PCR တူရိယာနှင့် ပေါင်းစပ်ကာ သင်၏ primer/probe အာရုံစူးစိုက်မှုအား ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်လုပ်ဆောင်ခြင်းသည် မရှိမဖြစ်လိုအပ်ပါသည်။

၂။ဤထုတ်ကုန်သည် ကျယ်ပြန့်စွာအသုံးချနိုင်မှုရှိပြီး အာရုံခံနိုင်စွမ်းမြင့်မားသော မော်လီကျူးရောဂါရှာဖွေခြင်းအတွက် သင့်လျော်သည်။အဆင့်သုံးဆင့် PCR နည်းလမ်းကို အပူချိန်နိမ့်ကျသော primer များအတွက် သို့မဟုတ် 200 bp ထက် ရှည်သောအပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်ရန်အတွက် အကြံပြုထားသည်။

၃။မတူညီသော amplicons များတွင် dUTP ၏ မတူညီသော အသုံးချမှုထိရောက်မှုနှင့် UNG အတွက် မတူညီသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းရှိသောကြောင့်၊ UNG စနစ်အသုံးပြုသည့်အခါ ထောက်လှမ်းသိရှိနိုင်မှု လျော့နည်းသွားပါက ဓာတ်ကူပစ္စည်းများကို ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်သင့်ပါသည်။လိုအပ်ပါက နည်းပညာအကူအညီအတွက် ကျွန်ုပ်တို့ထံ ဆက်သွယ်ပါ။

၄။သယ်ဆောင်သွားသော PCR ထုတ်ကုန်များကို ချဲ့ထွင်ခြင်းကို ရှောင်ရှားရန်၊ သီးသန့်စမ်းသပ်ဧရိယာနှင့် pipette ကို ချဲ့ထွင်ရန် လိုအပ်ပါသည်။လက်အိတ်များနှင့် မကြာခဏ ပြောင်းလဲပြီး အသံချဲ့ထွင်ပြီးနောက် PCR ပြွန်ကို မဖွင့်ပါနှင့်။