2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)

ကြောင်နံပါတ်- HCB5151A

SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) သည် DNA ထုတ်ယူခြင်း သို့မဟုတ် နမူနာပြင်ဆင်ခြင်းမရှိဘဲ PCR နမူနာများမှ တိုက်ရိုက်လုပ်ဆောင်ရန် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည်။ဤဓာတ်ပစ္စည်းများတွင် hot-start DNA polymerase၊ uracil DNA glycosylase (UNG)၊ RNase Inhibitor၊ MgCl တို့ ပါဝင်ပါသည်။₂၊ dNTPs (dUTP အစား dUTP ဖြင့်) နှင့် quantitative PCR (qPCR) အတွက် stabilizers များ။ဤဓာတ်ပစ္စည်းများသည် မြင့်မားသော inhibitor-ခံနိုင်ရည်ကို ကြိုပြင်ထားပြီး၊ ထို့ကြောင့် ၎င်းသည် လည်ချောင်းစုတ်တံ၊ တံတွေး၊ စေးပျစ်သောသွေးတစ်ခုလုံးကို ဆန့်ကျင်သော၊ ပလာစမာနှင့် သွေးရည်ကြည်တို့ကဲ့သို့ DNA ထုတ်ယူခြင်းမပြုဘဲ နမူနာများကို ထောက်လှမ်းရာတွင် တိုက်ရိုက်အသုံးချနိုင်သည်။ဓါတ်ဆေးသည် qPCR အတွက် မူပိုင်ကြားခံကြားခံကို အသုံးပြု၍ တားမြစ်ထားသော DNA polymerase နှင့် UNG အင်ဇိုင်းတို့ ရောနှောထားသော အင်ဇိုင်းများဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ ၎င်းသည် inhibitors များပါရှိသောနမူနာများတွင် ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇများကို ကောင်းမွန်စွာချဲ့ထွင်နိုင်ပြီး PCR အကြွင်းအကျန်နှင့် လေထုညစ်ညမ်းမှုကြောင့်ဖြစ်သော မှားယွင်းသောအပြုသဘောဆောင်သောချဲ့ထွင်မှုကို ဟန့်တားနိုင်သည်။ဤဓာတ်ပစ္စည်းများသည် အသုံးချဇီဝစနစ်များ၊ Eppendorf၊ Bio-Rad၊ Roche စသည်တို့ကဲ့သို့သော fluorescent quantitative PCR တူရိယာအများစုနှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။

အစိတ်အပိုင်းများ

1. 50× SensiDirect Enzyme/UNG ရောနှောခြင်း။

2. 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP)

သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ

အစိတ်အပိုင်းအားလုံးကို -20 ℃ ဖြင့် ရေရှည်သိုလှောင်ရန်နှင့် 4 ℃ 3 လအထိ ထားရှိသင့်သည်။အသုံးမပြုမီ ရောနှောပြီး စင်ထရစ်ဖယ်ပြီး သေချာရောမွှေပါ။မကြာခဏ အေးခဲခြင်းမှ ရှောင်ကြဉ်ပါ။

စက်ဘီးစီးခြင်းဆိုင်ရာ ပရိုတိုကော

Pipetting ညွှန်ကြားချက်များ

1. primer ၏နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသည် အများအားဖြင့် 0.2μM ဖြစ်သည်။ပိုမိုကောင်းမွန်သောရလဒ်များအတွက်၊ primer အာရုံစူးစိုက်မှုကို 0.2-1μM အကွာအဝေးအတွင်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပြုလုပ်နိုင်သည်။

2. ယေဘုယျအားဖြင့်၊ probe အာရုံစူးစိုက်မှုကို 0.1-0.3μM အကွာအဝေးအတွင်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပြုလုပ်နိုင်သည်။probe ၏ အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသည် အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR ချဲ့ထွင်မှုကိရိယာ၊ စူးစမ်းလေ့လာသည့်အမျိုးအစားနှင့် fluorescent တံဆိပ်တပ်သည့်အရာဝတ္ထုအမျိုးအစားတို့နှင့် သက်ဆိုင်သည်။ကျေးဇူးပြု၍ ကိရိယာလက်စွဲ သို့မဟုတ် ချောင်းထိုးကိရိယာတစ်ခုစီ၏ သီးခြားလိုအပ်ချက်များကို ကိုးကားပါ။

3. မတူညီသောနမူနာများတွင် မတူညီသောအမျိုးအစားများနှင့် အကြောင်းအရာများပါဝင်ပြီး ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇကို ကူးယူသည့်အရေအတွက်နှင့် တားဆီးပေးသည့်အကြောင်းအရာများ ပါဝင်သည်။နမူနာပမာဏကို ပကတိအခြေအနေအရ ထည့်သွင်းစဉ်းစားသင့်သည်။လိုအပ်ပါက နျူကလီးယားမပါသောရေ သို့မဟုတ် TE Buffer ကိုထည့်ခြင်းဖြင့်နမူနာကို အရောအနှောပြုလုပ်ပါ။

4. မတူညီသောနမူနာများ၏ အကြံပြုထားသော ပမာဏ-

အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

1. လုပ်ဆောင်ချက် ထောက်လှမ်းခြင်း- qPCR ၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ တိကျမှုနှင့် ထပ်တလဲလဲနိုင်မှု။

2. exogenous nuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိပါ- exogenous endonuclease နှင့် exonuclease ညစ်ညမ်းမှုမရှိပါ။

ထုတ်ကုန်မှတ်စုများ

1. ဤထုတ်ကုန်တွင် 1-5 မိနစ်အတွင်း အသက်သွင်းနိုင်သည့် hot-start DNA polymerase အမျိုးအစားသစ်ကို အသုံးပြုထားသည်။ ၎င်း၏တုံ့ပြန်မှုကြားခံကို ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသောကြောင့်၊ ၎င်းသည် စုံစမ်းစစ်ဆေးရေးနည်းလမ်းကို အသုံးပြု၍ နှစ်ဆ သို့မဟုတ် မျိုးစုံ fluorescence quantitative PCR အတွက် ပိုမိုသင့်လျော်ပါသည်။

2. PCR ချဲ့ထွင်မှု၏ Rn တန်ဖိုးသည် အလွန်နိမ့်နေပါက သို့မဟုတ် ချဲ့ထွင်မှုကို သိသာထင်ရှားစွာ ဟန့်တားပါက၊ နမူနာပမာဏကို လျော့ကျစေခြင်း၊ နမူနာ၏ တုံ့ပြန်မှုပမာဏ တိုးလာခြင်း သို့မဟုတ် ယခင်ဖျတ်ဖျတ်ထားသော ရလဒ်များကို ပိုမိုကောင်းမွန်စေမည်ဖြစ်သည်။

3. သွေး၊ တံတွေး၊ ဆီး၊ လည်ချောင်းစုတ်တံ စသည်တို့ကို ဆေးခန်းဆိုင်ရာ စံသတ်မှတ်ချက်များအတိုင်း စုဆောင်းထားသင့်ပြီး လတ်ဆတ်သောနမူနာကို နျူကလိစ်အက်ဆစ် ပျက်စီးခြင်းမှ ကာကွယ်ရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။

4. မတူညီသော amplicons များတွင် dUTP နှင့် UNG အတွက် sensitivity ကွဲပြားသော အသုံးချမှု ထိရောက်မှု ရှိသောကြောင့်၊ UNG စနစ်အား အသုံးပြုသည့်အခါ ထောက်လှမ်းမှု အာရုံခံနိုင်စွမ်း လျော့နည်းသွားပါက ဓါတ်ကူပစ္စည်းများကို ပိုမိုကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်သင့်ပါသည်။လိုအပ်ပါက နည်းပညာအကူအညီအတွက် ကျွန်ုပ်တို့ထံ ဆက်သွယ်ပါ။

5. အဆင့်တစ်ဆင့်တုံ့ပြန်မှုများကြားတွင်သယ်ဆောင်သွားသော PCR ထုတ်ကုန်များကို ချဲ့ထွင်ခြင်းကို ရှောင်ရှားရန်၊ သီးသန့်စမ်းသပ်ဧရိယာနှင့် pipette ကို ချဲ့ထွင်ရန် လိုအပ်ပါသည်။လက်အိတ်များနှင့် မကြာခဏ ပြောင်းလဲပြီး PCR ချဲ့ထွင်ပြီးနောက် တုံ့ပြန်မှုပြွန်ကို မဖွင့်ပါနှင့်။