2×HiF Taq နှင့် Master Mix
ကြောင်နံပါတ်- HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (With Dye) သည် Plus HIF DNA Polymerase၊ dNTPs နှင့် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသော ကြားခံများပါရှိသော အဆင်သင့်အသုံးပြုနိုင်သည့် 2×premixed solution တစ်ခုဖြစ်သည်။လွယ်ကူပြီး အထူးတိကျသော Hot Start PCR အတွက် 3′→5′exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်ကို အခန်းတွင်းအပူချိန်တွင် monoclonal antibodies နှစ်ခုနှင့် 3′→5′exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်ကို ပေါင်းထည့်ထားသည်။အင်ဇိုင်းအား ရှည်လျားသောအပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်နိုင်စွမ်းရှိစေရန်၊ ချဲ့ထွင်မှု၏အရှည်သည် 13 kb အထိရှိနိုင်ပြီး၊ အင်ဇိုင်းတွင် 5′→3′ DNA polymerase လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် 3′→5′ ပါ၀င်သည်။ exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်၊ ၎င်း၏သစ္စာရှိမှုသည် သာမန် DNA polymerase ထက် ၉ ဆဖြစ်သည့် Taq DNA polymerase ၏ 83 ဆဖြစ်သည်။၎င်းသည် ရှုပ်ထွေးသော ပုံစံများကို ချဲ့ထွင်ရန် သင့်လျော်သည်၊ ချဲ့ထွင်ခြင်း ထုတ်ကုန်သည် တုံးတိတိ အဆုံးဖြစ်သည်။
2×HIF Taq plus Master Mix(With Dye) သည် မြန်ဆန်လွယ်ကူသည်၊ မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ ပြင်းထန်သောတိကျမှု၊ တည်ငြိမ်မှုစသည်ဖြင့် အားသာချက်များ ရှိသည်၊ တုံ့ပြန်မှုစနစ်သည် primers နှင့် templates များကိုသာထည့်ရန်လိုအပ်ပြီး နှစ်ခုဖြင့် ချဲ့နိုင်သည်။ အဆင့်ပရိုတိုကော၊ စမ်းသပ်မှုအဆင့်များကို ရိုးရှင်းစေပြီး အချိန်ကုန်သက်သာစေသည်။ဤထုတ်ကုန်တွင် electrophoresis အချက်ပြအရောင်ဆိုးများပါ၀င်ပြီး PCR ထုတ်ကုန်များကို electrophoresis အတွက် တိုက်ရိုက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ထို့အပြင်၊ ထုတ်ကုန်တွင် ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲသွားပြီးနောက် တည်ငြိမ်သောလှုပ်ရှားမှုကို ထိန်းသိမ်းထားနိုင်ရန် တိကျသောအကာအကွယ်အေးဂျင့်တစ်ခုလည်းပါရှိသည်။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန်များကို -25 ~ 15 ℃ 1 နှစ်ကြာသိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
သတ်မှတ်ချက်များ
ထုတ်ကုန်သတ်မှတ်ချက် | မာစတာရောနှော |
အာရုံစူးစိုက်မှု | 2× |
ဟော့စတင် | Built-in Hot Start |
Overhang | တုံးတယ်။ |
တုံ့ပြန်မှုအရှိန် | မြန်သည်။ |
အရွယ်အစား (နောက်ဆုံးထုတ်ကုန်) | 13kb အထိ |
သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးအခြေအနေများ | ရေခဲခြောက် |
ထုတ်ကုန်အမျိုးအစား | မြင့်မားသောသစ္စာစောင့်သိမှု PCR အကြိုပေါင်းစပ်မှုများ |
ညွှန်ကြားချက်များ
၁။PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်
အစိတ်အပိုင်းများ | ထုထည် (μL) |
DNA ပုံစံ | သင့်လျော်သည်။ |
ရှေ့သို့ primer (10 μmol/L) | ၂.၅ |
ပြောင်းပြန် primer (10 μmol/L) | ၂.၅ |
2×HIF Taq နှင့် Master Mix | 25 |
ddH2O | 50 သို့ |
၂။မတူညီသော ပုံစံများကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။
ပုံစံခွက်အမျိုးအစား | အပိုင်းအစများကို 1kb မှ 10 kb အထိ ချဲ့ပါ။ |
မျိုးရိုးဗီဇ DNA | 50ng-200 ng |
Plasmid သို့မဟုတ် Viral DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2.5 µL (နောက်ဆုံး PCR တုံ့ပြန်မှုပမာဏ၏ 10% ထက်မပိုပါနှင့်) |
၃။ချဲ့ထွင်မှု ပရိုတိုကော
1) Two-Step Protocol (ရှုပ်ထွေးမှုပုံစံ)
သံသရာခြေလှမ်း | အပူချိန် | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
ကနဦး အသွင်အပြင် | 98 ℃ | ၃ မိနစ် | 1 |
Denaturation | 98 ℃ | 10 စက္ကန့် | ၃၀-၃၅ |
တိုးချဲ့မှု | 68 ℃ | 30 sec/kb | |
နောက်ဆုံးသက်တမ်းတိုး | 72 ℃ | ၅ မိနစ် | 1 |
2) Three-Step Protocol (ပုံမှန် ပရိုတိုကော)
သံသရာခြေလှမ်း | အပူချိန် | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
ကနဦး အသွင်အပြင် | 98 ℃ | ၃ မိနစ် | 1 |
Denaturation | 98 ℃ | 10 စက္ကန့် | ၃၀-၃၅ |
ဖြာထွက်ခြင်း။ | 60 ℃ | 20 စက္ကန့် | |
တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
နောက်ဆုံးသက်တမ်းတိုး | 72 ℃ | ၅ မိနစ် | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (ရှုပ်ထွေးမှုပုံစံ)
သံသရာခြေလှမ်း | အပူချိန် | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
ကနဦး အသွင်အပြင် | 98 ℃ | ၃ မိနစ် | 1 |
Denaturation | 98 ℃ | 10 စက္ကန့် | ၁၅ (စက်ဝန်းတစ်ခုလျှင် 1 ℃ လျော့ချခြင်း) |
Gradient annealing | 70-55 ℃ | 20 စက္ကန့် | |
တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
Denaturation | 98 ℃ | 10 စက္ကန့် |
20 |
ဖြာထွက်ခြင်း။ | 55 ℃ | 20 စက္ကန့် | |
တိုးချဲ့မှု | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
နောက်ဆုံးသက်တမ်းတိုး | 72 ℃ | ၅ မိနစ် | 1 |
မတူညီသော ချဲ့ထွင်မှု ပရိုတိုကောအောက်တွင် အင်္ဂါရပ်များ
ပရိုတိုကိုl | နှစ်ဆင့် | သုံးဆင့် | Gradient annealing |
Spec. | မြန်သည်။ | အလယ်အလတ် | နှေးနှေး |
တိကျမှု | မြင့်မားသော | အလယ်အလတ် | မြင့်မားသော |
PCR အထွက်နှုန်း | အလယ်အလတ် | မြင့်မားသော | အလယ်အလတ် |
ထောက်လှမ်းမှုနှုန်း | မြင့်မားသော | အလယ်အလတ် | မြင့်မားသော |
မှတ်စုများ
သင့်ကျန်းမာရေးနှင့် ဘေးကင်းစေရန်အတွက် လိုအပ်သော PPE၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီနှင့် လက်အိတ်များကို ဝတ်ဆင်ပါ။