2×PCR Super Mix (ဆိုးဆေးပါသော)
2× PCR Master Mix တွင် Taq DNA Polymerase၊ dNTPs နှင့် အခြား PCR လိုအပ်သော အစိတ်အပိုင်းများ ပါရှိသည်။Master Mix သည် ကျွန်ုပ်တို့၏စိတ်ကြိုက် stabilizers ဖြင့် 3 လ 4 ℃ တည်ငြိမ်သည်။အကြိုရောစပ်ဖြေရှင်းချက်အား သမားရိုးကျ PCR အတွက် အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပြုလုပ်ထားပြီး DNA နမူနာပုံစံနှင့် primers များကို ပေါင်းထည့်ခြင်းဖြင့် အသုံးပြုရန် အသင့်ဖြစ်နေပါပြီ။ကြိုတင်ထည့်သွင်းထားသော ဘရိုမိုဖီနောအပြာရောင်ဆိုးဆေးဖြင့် electrophoresis အတွက် PCR ထုတ်ကုန်များကို တိုက်ရိုက်တင်ဆောင်နိုင်ပါသည်။ချဲ့ထွင်ထားသောထုတ်ကုန်များတွင် 3'-dA protrusion ပါ၀င်ပြီး T vector သို့ အလွယ်တကူပုံတူပွားနိုင်သည်။2×PCR Master Mix သည် PCR လုပ်ငန်းစဉ်ကို ရိုးရှင်းစေပြီး ညစ်ညမ်းမှုကို လျှော့ချပေးသည်။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ
ထုတ်ကုန်များကို -25 ℃ ~ 15 ℃ 2 နှစ်ကြာသိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
သတ်မှတ်ချက်များ
သစ္စာရှိမှု(vs.Taq) | 1× |
ဟော့စတင် | No |
Overhang | 3 '-A |
Polymerase | Taq DNA Polymerase |
တုံ့ပြန်မှုပုံစံ | SuperMix သို့မဟုတ် Master Mix |
တုံ့ပြန်မှုအရှိန် | စံ |
ထုတ်ကုန်အမျိုးအစား | PCR Master Mix (2x) |
ညွှန်ကြားချက်များ
၁။တုံ့ပြန်မှုစနစ်
အစိတ်အပိုင်းများ | အတွဲ(μL) |
နမူနာပုံစံ DNA | သင့်လျော်သည်။ |
Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
2× PCR Master Mix | 25 |
ddH2O | 50 သို့ |
2.ချဲ့ထွင်မှု ပရိုတိုကော
သံသရာခြေလှမ်းများ | အပူချိန် (°C) | အချိန် | ဟုတ်ရဲ့လား။ |
ကနဦး အသွင်အပြင် | 94 | ၅ မိနစ် | 1 |
Denaturation | 94 | 30 စက္ကန့် | 35 |
ဖြာထွက်ခြင်း။ | ၅၀-၆၀ | 30 စက္ကန့် | |
တိုးချဲ့မှု | 72 | 30-60 sec/kb | |
နောက်ဆုံးသက်တမ်းတိုး | 72 | ၁၀ မိနစ် | 1 |
မှတ်ချက် -
1) နမူနာပုံစံအသုံးပြုမှု- 50-200ng မျိုးဗီဇ DNA၊0.1-10ng plasmid DNA
2) မောင်2+အာရုံစူးစိုက်မှု- ဤထုတ်ကုန်တွင် MgCl2 ၏ 3mM ပါဝင်သည်၊၊ PCR တုံ့ပြန်မှုအများစုအတွက် သင့်လျော်သည်။
3) Annealing temperature- primers ၏သီအိုရီ Tm တန်ဖိုးကို ကျေးဇူးပြု၍ ကိုးကားပါ။primer ၏သီအိုရီတန်ဖိုးထက် 2-5 ℃ မှ annealing temperature ကိုနိမ့်အောင်သတ်မှတ်နိုင်သည်။
4) တိုးချဲ့ချိန်- မော်လီကျူးသတ်မှတ်ခြင်းအတွက် 30 sec/kb ကို အကြံပြုထားသည်။gene cloning အတွက် 60 sec/kb ကို အကြံပြုထားသည်။
မှတ်စုများ
၁။2× PCR Master Mix ပါရှိသော PCR ထုတ်ကုန်များသည် polyacrylamide gel electrophoresis အတွက် မသင့်လျော်ပါ။
၂။သင့်ဘေးကင်းရေးနှင့် ကျန်းမာရေးအတွက် ကျေးဇူးပြု၍ ခွဲစိတ်ခန်းသုံး အင်္ကျီများနှင့် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များ ဝတ်ဆင်ပါ။
၃။၎င်းကို သုတေသနအတွက် အသုံးပြုရန်သာ အသုံးပြုပါသည်။