M-MLV Reverse Transcriptase
RevScript Reverse transcriptase ကို မျိုးရိုးဗီဇအင်ဂျင်နီယာနည်းပညာဖြင့် ရရှိသည်။၎င်းတွင် ပိုမိုမြင့်မားသော cDNA ပေါင်းစပ်နိုင်စွမ်း၊ အပူတည်ငြိမ်မှုနှင့် တုံ့ပြန်မှုအပူချိန်ကန့်သတ်ချက် (60°C အထိ) ရှိသည်။ပေါင်းစပ်ထားသော cDNA ထုတ်ကုန်သည် 10 kb အထိရှိသည်။၎င်းသည် တင်းပလိတ်များ၏ ရင်းနှီးမှုကို တိုးမြင့်စေပြီး ရှုပ်ထွေးသော အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံ သို့မဟုတ် ကော်ပီဗီဇနည်းသော RNA နမူနာပုံစံများကို ပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်းအတွက် သင့်လျော်သည်။
အစိတ်အပိုင်းများ
| အစိတ်အပိုင်း | HC2003Bစာ-၀၁ (10,000U) | HC2003Bစာ-၀၂ (5*10,000U) | HC2003Bစာ-၀၃ (200,000U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 mL |
| 5 × RevScript Buffer | 250 μL | 1.25 mL | 5 mL |
သိုလှောင်မှုအခြေအနေ
ဤထုတ်ကုန်ကို -25°C~-15°C တွင် ၂နှစ်ကြာ သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်
ယူနစ်တစ်ခုသည် Oligo(dT) ကို primer အဖြစ်အသုံးပြု၍ 37°C တွင် 10 မိနစ်အတွင်း အက်ဆစ်မပျော်ဝင်နိုင်သော ပစ္စည်းအဖြစ် 10 မိနစ်အတွင်း dTTP ကို ပေါင်းစပ်ထားသည်။
တုံ့ပြန်မှု စနစ်ထည့်သွင်းခြင်း။
1. RNA နမူနာပုံစံ၏ အရောင်ပြောင်းလဲခြင်း (ဤအဆင့်သည် စိတ်ကြိုက်ရွေးချယ်နိုင်သည်၊ RNA နမူနာပုံစံ၏ denaturation သည် ပထမကြိုးမျှင် cDNA ၏ အထွက်နှုန်းကို တိုးတက်စေမည့် အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံကိုဖွင့်ရန် ကူညီပေးသည်။)
| အစိတ်အပိုင်းများ | အတွဲ (μL) |
| RNase အခမဲ့ ddH2O | ၁၃ |
| အိုလီဂို(dT)18 (50 μmol/L) သို့မဟုတ် ကျပန်း Primer (50 μmol/L) သို့မဟုတ် မျိုးဗီဇ သီးသန့် Primers (2 μmol/L) | 1 |
| သို့မဟုတ် ၁ | |
| သို့မဟုတ် ၁ | |
| RNA နမူနာပုံစံ | Xa |
မှတ်စုများ-
1) a- စုစုပေါင်း RNA: 1-5 ug သို့မဟုတ် mRNA: 1-500 ng
2) အပူချိန် 65°C တွင် 5 မိနစ်ခန့် ဖုတ်ပြီး 2 မိနစ် အအေးခံရန် ရေခဲပေါ်တွင် ချက်ချင်း လွှဲပေးပါ။တုံ့ပြန်မှုအရည်ကို စုဆောင်းရန် အတိုချုံး centrifugation၊ အောက်ဖော်ပြပါဇယားတွင် ပြထားသည့်အတိုင်း ပြောင်းပြန် စာသားပြောင်းပြန်တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်ကို ထည့်ပါ။ညင်သာစွာ ပိုက်လုံး ရောမွှေပါ။
1. တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောကိုပြင်ဆင်ခြင်း (20 μL ထုထည်)
| အစိတ်အပိုင်းများ | အတွဲ (μL) |
| အရောအနှော၏ ယခင်အဆင့် | 13 |
| 5× ကြားခံ | 4 |
| dNTP ရောနှော (10nmol/L) | 1 |
| Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 |
| RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 |
1.အောက်ပါအခြေအနေများအောက်တွင် တုံ့ပြန်မှုကို လုပ်ဆောင်ပါ။
| အပူချိန် (°C) | အချိန် |
| 25°Ca | ၅ မိနစ် |
| 42°Cb | 15-30 မိနစ် |
| 85°Cc | ၅ မိနစ် |
မှတ်စုများ-
1) a.25°C တွင် 5 မိနစ်ကြာ ပေါက်ဖွားခြင်းသည် ကျပန်း hexamers ကို အသုံးပြုရန်အတွက်သာ လိုအပ်ပါသည်။Oligo (dT) ကို အသုံးပြုသည့်အခါ ဤအဆင့်ကို ကျော်သွားပါ18သို့မဟုတ် Gene Specific Primer
၂) ခ။အကြံပြုထားသော ပြောင်းပြန်စာသားအပူချိန်သည် 42°C ဖြစ်ပြီး၊ ရှုပ်ထွေးသောအလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံများ သို့မဟုတ် မြင့်မားသော GC ပါဝင်မှုရှိသော နမူနာများအတွက်၊ တုံ့ပြန်မှုအပူချိန်ကို 50-55°C အထိ မြှင့်တင်ရန် အကြံပြုထားသည်။
၃) ဂ။reverse transcriptase ကို အသက်မသွင်းရန် 85°C တွင် 5 မိနစ်ကြာ အပူပေးခြင်း။
4) ထုတ်ကုန်ကို PCR သို့မဟုတ် qPCR တုံ့ပြန်မှုများတွင် တိုက်ရိုက်အသုံးပြုနိုင်သည်၊ သို့မဟုတ် ရေတိုသိုလှောင်မှုအတွက် -20°C တွင် သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။ထုတ်ကုန်များကို ပိုင်းခြား၍ ရေရှည်သိုလှောင်ရန်အတွက် -80°C တွင် သိမ်းဆည်းရန် အကြံပြုထားသည်။မကြာခဏ အေးခဲခြင်းမှ ရှောင်ကြဉ်ပါ။
5) ထုတ်ကုန်သည် အဆင့်တစ်ဆင့် RT-qPCR အတွက် သင့်လျော်သည်၊ 25μL တုံ့ပြန်မှုစနစ်တိုင်းအတွက် 10-20 U reverse transcriptase ကို ထည့်ရန် သို့မဟုတ် ပကတိအခြေအနေအရ ပြောင်းပြန် transcriptase ပမာဏကို တဖြည်းဖြည်း တိုးမြှင့်ရန် အကြံပြုထားသည်။
မှတ်စုများ
1.စမ်းသပ်ဧရိယာကို သန့်ရှင်းအောင်ထားပါ။ခွဲစိတ်နေစဉ်အတွင်း သန့်ရှင်းသော လက်အိတ်များနှင့် နှာခေါင်းစည်းများကို ဝတ်ဆင်သင့်သည်။RNase ညစ်ညမ်းမှုကို တားဆီးရန် စမ်းသပ်မှုတွင် အသုံးပြုသည့် စားသုံးကုန်အားလုံးသည် RNase အခမဲ့ ဖြစ်သင့်သည်။
2. RNA ပျက်ဆီးခြင်းမှ ကာကွယ်ရန် လုပ်ထုံးလုပ်နည်းအားလုံးကို ရေခဲပေါ်တွင် ပြုလုပ်သင့်သည်။
3. အရည်အသွေးမြင့် RNA နမူနာများကို ပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်း၏ မြင့်မားသောထိရောက်မှုသေချာစေရန် အကြံပြုထားသည်။
4. ဤထုတ်ကုန်သည် သုတေသနပြုလုပ်ရန်အတွက်သာဖြစ်သည်။
5. သင့်ဘေးကင်းစေရန်အတွက် ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီများနှင့် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များဖြင့် ကျေးဇူးပြု၍ လုပ်ဆောင်ပါ။
