DNase I

DNase I (Deoxyribonuclease I) သည် တစ်ခုတည်းသော သို့မဟုတ် နှစ်ဆသော DNA ကို ချေဖျက်နိုင်သော endodeoxyribonuclease ဖြစ်သည်။၎င်းသည် monodeoxynucleotides သို့မဟုတ် 5′-terminal တွင် phosphate အုပ်စုများနှင့်အတူ monodeoxynucleotides သို့မဟုတ် single- or double-stranded oligodeoxynucleotides ကိုထုတ်လုပ်ရန် phosphodiester နှောင်ကြိုးများကို အသိအမှတ်ပြုပြီး ဖြတ်သည်။DNase I ၏လုပ်ဆောင်ချက်သည် Ca2+ ပေါ်တွင်မူတည်ပြီး Mn2+ နှင့် Zn2+ ကဲ့သို့သော ကွဲပြားသောသတ္တုအိုင်းယွန်းများဖြင့် အသက်သွင်းနိုင်သည်။5mM Ca2+ သည် အင်ဇိုင်းအား Hydrolysis မှ ကာကွယ်ပေးသည်။Mg2+ ၏ရှေ့မှောက်တွင်၊ အင်ဇိုင်းသည် မည်သည့် DNA ကြိုးမျှင်ပေါ်ရှိ မည်သည့်ဆိုဒ်ကိုမဆို ကျပန်းမှတ်မိပြီး ခွဲထုတ်နိုင်သည်။Mn2+ ၏ရှေ့မှောက်တွင်၊ DNA ကြိုးနှစ်ထပ်ကို တစ်ပြိုင်နက်တည်း အသိအမှတ်ပြုနိုင်ပြီး အပြားလိုက် DNA အပိုင်းအစများ သို့မဟုတ် 1-2 nucleotides အပြူးထွက်နေသော DNA အပိုင်းအစများ ဖွဲ့စည်းရန် တူညီသောနေရာတစ်ခုနီးပါးတွင် ထွင်းဖောက်နိုင်သည်။

ကုန်ပစ္စည်းပိုင်ဆိုင်မှု

Bovine Pancreas DNase I ကို တဆေးထုတ်ဖော်မှုစနစ်တွင် ဖော်ပြပြီး သန့်စင်သည်။

Cအစိတ်အပိုင်းများ

သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးနှင့် သိုလှောင်မှု

1. သိုလှောင်မှုတည်ငြိမ်မှု - သိုလှောင်မှုအတွက် 15 ℃ ~ 25 ℃;

2.ပို့ဆောင်ရေးတည်ငြိမ်မှု- ရေခဲအိတ်များအောက်တွင် သယ်ယူပို့ဆောင်ခြင်း၊

3. ပံ့ပိုးပေးသည်- 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl₂၊ 50% glycerol၊ pH 7.6 မှာ 25 ℃။

ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်

တစ်ယူနစ်ကို 37°C တွင် 10 မိနစ်အတွင်း pBR322 DNA ၏ 1 µg လုံးဝပြိုကွဲသွားမည့် အင်ဇိုင်းပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်သည်။

အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

RNase-37 ℃ တွင် 4 နာရီကြာ 1.6 μg MS2 RNA ပါသော DNase I ၏ 5U သည် agarose gel electrophoresis မှသတ်မှတ်ထားသည့်အတိုင်း ပြိုကွဲခြင်းမရှိပါ။

ဘက်တီးရီးယား Endotoxin-LAL-test၊ Chinese Pharmacopoeia IV 2020 ထုတ်ဝေမှုအရ၊ ဂျယ်ကန့်သတ်စမ်းသပ်နည်းလမ်း၊ အထွေထွေစည်းမျဉ်း (1143) အရ။ဘက်တီးရီးယား endotoxin ပါဝင်မှုသည် ≤10 EU/mg ဖြစ်သင့်သည်။

အသုံးပြုရန်လမ်းညွှန်ချက်များ

1. အောက်ဖော်ပြပါ အချိုးအစားအရ RNase-free ပြွန်အတွင်း တုံ့ပြန်မှုအဖြေကို ပြင်ဆင်ပါ။

2.37 ℃ 15 မိနစ်;

3. တုံ့ပြန်မှုကိုရပ်တန့်ရန် ရပ်စဲသည့်ကြားခံကို ပေါင်းထည့်ကာ DNase I ကို အသက်မဝင်စေရန် 10 မိနစ်ကြာ 65 ℃ တွင် အပူပေးပါ။ နမူနာအား နောက်လာမည့် စာသားမှတ်တမ်းစမ်းသပ်မှုအတွက် တိုက်ရိုက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။

မှတ်စုများ

1. RNA ၏ μg လျှင် 1U DNase I သို့မဟုတ် 1U DNase I ကို RNA ၏ 1μg အောက်ကို အသုံးပြုပါ။

2.EDTA ကို အင်ဇိုင်းမလှုပ်ရှားစဉ်အတွင်း RNA ဆုတ်ယုတ်ခြင်းမှကာကွယ်ရန် နောက်ဆုံးပြင်းအား 5 mM တွင် ပေါင်းထည့်သင့်သည်။