CHO HCP ELISA Kit
ဤစစ်ဆေးမှုတွင် အဆင့်တစ်ဆင့် ခုခံအားစုပ်ယူနိုင်သော ELISA နည်းလမ်းကို အသုံးပြုသည်။CHOK1 HCP ပါရှိသောနမူနာများသည် HRP-တံဆိပ်တပ်ထားသောဆိတ်ဆန့်ကျင်ဘက်-CHOK1 ပဋိပစ္စည်းနှင့် ELISA ပန်းကန်ပြားပေါ်တွင် ဖုံးအုပ်ထားသော HRP-တံဆိပ်တပ်ထားသော ဆန့်ကျင်ပစ္စည်းနှင့် တစ်ချိန်တည်းတုံ့ပြန်ပြီး နောက်ဆုံးတွင် အစိုင်အခဲအဆင့် ပဋိပစ္စည်း-HCP-တံဆိပ်တပ်ထားသော ပဋိပစ္စည်း၏ အသားညှပ်ပေါင်မုန့်ကို ဖွဲ့စည်းထားသည်။ELISA ပန်းကန်ပြားကို ဆေးကြောခြင်းဖြင့် ချည်နှောင်ထားသော အန်တီဂျင်-ပဋိပစ္စည်းကို ဖယ်ရှားနိုင်သည်။လုံလောက်သောတုံ့ပြန်မှုအတွက် TMB အလွှာကို ရေတွင်းထဲသို့ထည့်သည်။ရပ်တန့်ဖြေရှင်းချက်ထည့်ပြီးနောက် အရောင်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုကို ရပ်တန့်လိုက်ပြီး 450/650nm ရှိ တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်၏ OD သို့မဟုတ် စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးကို မိုက်ခရိုပြားဖတ်စက်ဖြင့် ဖတ်သည်။OD တန်ဖိုး သို့မဟုတ် စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးသည် ဖြေရှင်းချက်ရှိ HCP ပါဝင်မှုနှင့် အချိုးကျပါသည်။ယင်းမှ၊ ဖြေရှင်းချက်တွင် HCP အာရုံစူးစိုက်မှုကို စံမျဉ်းကွေးအတိုင်း တွက်ချက်နိုင်သည်။
လျှောက်လွှာ
နမူနာများတွင် CHOK1 လက်ခံဆဲလ်ပရိုတိန်းအကြွင်းအကျန်များ၏ အကြောင်းအရာကို အတိုင်းအတာဖြင့် သိရှိရန် ဤကိရိယာကို အသုံးပြုသည်။
Cအစိတ်အပိုင်းများ
| S/N | အစိတ်အပိုင်း | အာရုံစူးစိုက်မှု | သိုလှောင်မှုအခြေအနေများ |
| 1 | CHOK1 HCP စံနှုန်း | 0.5mg/mL | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤-20 ℃၊ အလင်းရောင်မှ ကာကွယ်ပေးသည်။ |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃၊ အလင်းမှကာကွယ်ပါ။ |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | ဖြေရှင်းချက် ရပ်လိုက်ပါ။ | NA | RT |
| 6 | မိုက်ခရိုပလိတ် တံဆိပ်ခတ်စက်များ | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | မြင့်မားသောစုပ်ယူမှုအကြို- coating ပန်းကန်များ | NA | 2-8 ℃ |
စက်ပစ္စည်း လိုအပ်သည်။
| လူသုံးကုန်/ပစ္စည်းများ | ထုတ်လုပ်ခြင်း။ | ကက်တလောက် |
| မိုက်ခရိုပြားဖတ်စက် | မော်လီကျူး ကိရိယာများ | Spectra Max M5၊ M5e သို့မဟုတ် ညီမျှသည်။ |
| အပူချိန်ထိန်းကိရိယာ | Eppendorf | Eppendorf/5355 သို့မဟုတ် ညီမျှသည်။ |
| Vortex mixer | IKA | MS3 ဒစ်ဂျစ်တယ် သို့မဟုတ် ညီမျှသည်။ |
သိုလှောင်မှုနှင့် တည်ငြိမ်မှု
1.-25~-15°C တွင် သယ်ယူပို့ဆောင်ရေး။
2.သိုလှောင်မှုအခြေအနေများသည် ဇယား 1 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်းဖြစ်သည်။အစိတ်အပိုင်းများ 1-2 ကို ≤–20°C တွင် သိမ်းဆည်းထားပြီး 5-6 ကို RT၊3၊4,7,8 ကို 2-8 ℃ တွင် သိမ်းဆည်းထားသည်။သက်တမ်းသည် 12 လဖြစ်သည်။
ထုတ်ကုန်ဘောင်များ
1.အာရုံခံနိုင်စွမ်း- 1ng/mL
၂။ထောက်လှမ်းမှုအတိုင်းအတာ: 3- 100ng/mL
၃။တိကျမှု- Intra-assay CV≤ 10%, inter- assay CV≤ 15%
၄။HCP လွှမ်းခြုံမှု- > 80%
၅။တိကျမှု- ဤကိရိယာသည် သန့်စင်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်မပါဘဲ CHOK1 HCP နှင့် အထူးတုံ့ပြန်သောကြောင့် universal ဖြစ်သည်။
Reagent ပြင်ဆင်ခြင်း။
၁။PBST 0.05%
ddH တွင် ရောထားသော 20×PBST 0.05% ၏ 15 ml ကိုယူပါ။2O နှင့် 300 ml အထိ ပြုလုပ်ထားသည်။
၂။1.0% BSA
ပုလင်းထဲမှ BSA 1g ကိုယူ၍ 100 ml တွင် PBST 0.05% ဖြင့် အရည်ပျော်သည်အထိ ရောမွှေပြီး 2-8°C တွင် သိမ်းဆည်းပါ။ပြင်ဆင်ထားသည့် ပျော့ပြောင်းသည့်ကြားခံသည် 7 ရက်အထိ သက်တမ်းရှိသည်။လိုအပ်သလို ပြင်ဆင်ဖို့ အကြံပြုထားပါတယ်။
၃။ထောက်လှမ်းဖြေရှင်းချက် 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP ၏ 48μL ကိုသောက်ပြီး 2μg/mL ထောက်လှမ်းမှုဖြေရှင်းချက်၏ နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုရရှိရန် 11,952μL BSA ၏ 11,952μL တွင် အရောအနှော။
၄။QC နှင့် CHOK1 HCP စံနှုန်းများ ပြင်ဆင်ခြင်း။
| အဝီစိ မရှိ | မူရင်း | အာရုံစူးစိုက်မှု | အတွဲ | 1%BSA | စုစုပေါင်း Volume | နောက်ဆုံး |
| A | စံ | 0.5mg/mL | 10 | ၄၉၀ | ၅၀၀ | ၁၀၀၀၀ |
| B | A | ၁၀၀၀၀ | 50 | ၄၅၀ | ၅၀၀ | ၁၀၀၀ |
| S1 | B | ၁၀၀၀ | 50 | ၄၅၀ | ၅၀၀ | ၁၀၀ |
| S2 | S1 | ၁၀၀ | ၃၀၀ | ၁၀၀ | ၄၀၀ | 75 |
| S3 | S2 | 75 | ၂၀၀ | ၁၇၅ | ၃၇၅ | 40 |
| S4 | S3 | 40 | ၁၅၀ | ၃၅၀ | ၅၀၀ | 12 |
| S5 | S4 | 12 | ၂၀၀ | ၂၀၀ | ၄၀၀ | 6 |
| S6 | S5 | 6 | ၂၀၀ | ၂၀၀ | ၄၀၀ | 3 |
| NC | NA | NA | NA | ၂၀၀ | ၂၀၀ | 0 |
| QC | S1 | ၁၀၀ | 50 | ၂၀၀ | ၂၅၀ | 20 |
ဇယား- QC နှင့် စံချိန်စံညွှန်းများ ပြင်ဆင်ခြင်း။
စစ်ဆေးမှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်း
၁။အထက်ဖော်ပြပါ “Reagent Preparation” တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ဓာတ်ပစ္စည်းများကို ပြင်ဆင်ပါ။
၂။ရေတွင်းတစ်ခုစီထဲသို့ 50μL စံချိန်စံညွှန်းများ၊ နမူနာများနှင့် QCs (ဇယား 3 ကိုရည်ညွှန်းပါ) ကိုယူပါ၊ ထို့နောက် 100μL of Detection solution (2μg/mL) ကိုထည့်ပါ။ပန်းကန်ပြားကို အလုံပိတ်ဖြင့် ဖုံးအုပ်ပြီး ELISA ပန်းကန်ပြားကို သာမိုဖျော်စက်ပေါ်တွင် တင်ပါ။500rpm၊ 25±3℃ တွင် ၂နာရီကြာ ပျိုးထောင်ပါ။
၃။စုပ်ခွက်အတွင်းရှိ မိုက်ခရိုပလိတ်ကို ပြောင်းပြန်လှန်ပြီး အပေါ်ယံဖြေရှင်းချက်ကို စွန့်ပစ်ပါ။ELISA ပန်းကန်ပြားကို ဆေးကြောရန် ရေတွင်းတစ်ခုစီတွင် PBST 300μL ၏ PBST 0.05% ပိုက်ဆက် 300μL ကို စွန့်ပစ်ပြီး ၃ ကြိမ် ထပ်ဆေးပါ။ပန်းကန်ပြားကို သန့်ရှင်းသော စက္ကူပဝါပေါ်တွင် ပြောင်းပြန်လှန်ပြီး ခြောက်အောင်သုတ်ပါ။
၄။100μL ofTMB substrate (ဇယား 1 ကိုကြည့်ပါ) ရေတွင်းတစ်ခုစီတွင်ထည့်ပါ၊ ELISA ပန်းကန်ပြားကိုပိတ်ကာ 25 ± 3 ℃ အမှောင်ထဲတွင် 15 မိနစ်ကြာဖုတ်ပါ။
၅။Pipette 100μL of stop solution သည် ရေတွင်းတစ်ခုစီသို့။
၆။microplate reader ဖြင့် လှိုင်းအလျား 450/650nm တွင် စုပ်ယူမှုကို တိုင်းပါ။
၇။SoftMax သို့မဟုတ် တူညီသောဆော့ဖ်ဝဲလ်ဖြင့် ဒေတာကို ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာပါ။လေးခုပါရာမီတာ ထောက်ပံ့ပို့ဆောင်ရေး ဆုတ်ယုတ်မှုပုံစံကို အသုံးပြု၍ စံမျဉ်းကွေးကို ရေးဆွဲပါ။
Standard Curve နမူနာ
မှတ်ချက်- နမူနာတွင် HCP ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် စံမျဉ်းကွေး၏ အပေါ်ပိုင်းကန့်သတ်ချက်ထက် ကျော်လွန်နေပါက၊ ၎င်းအား စမ်းသပ်ခြင်းမပြုမီ ဒိုင်ယာရီကြားခံဖြင့် မှန်ကန်စွာ ရောစပ်ထားရန် လိုအပ်သည်။
မှတ်စုများ
ရပ်တန့်ဖြေရှင်းချက်သည် 2M ဆာလဖူရစ်အက်ဆစ်ဖြစ်သည်၊ ရေပက်ခြင်းကိုရှောင်ရှားရန် ဂရုတစိုက်ကိုင်တွယ်ပါ။
